精子細(xì)胞BWW培養(yǎng)基儲(chǔ)存液

精子細(xì)胞BWW培養(yǎng)基儲(chǔ)存液公司正在銷售的產(chǎn)品：兔ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)試劑盒 Anti-CDR2 Antibody磷酸化p53結(jié)合蛋白1抗體
兔Dickkopf 相關(guān)蛋白2(DKK2)試劑盒 Anti-CEACAM5 AntibodyPDZ結(jié)構(gòu)域蛋白GOPC抗體
兔卵泡抑素(FST)試劑盒 Anti-CDR2 Antibody轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體
兔去唾液酸糖蛋

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：培養(yǎng)基

儲(chǔ)存條件  4℃,12個(gè)月

用途  精子細(xì)胞BWW培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)  無菌溶液。經(jīng)過濾除菌處理。配置BWW培養(yǎng)基的方法，每100ml儲(chǔ)存液添加210mg碳酸氫鈉，100mg葡萄糖，0.37ml乳酸鈉，丙酮酸鈉， BSA，10000U 青霉素，10mg鏈霉素等成分。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

醛脫氫9家族成員A1(ALDH9A1)ALDH9A1 ELISA Kit鈣離子通道a1F亞型抗體包裝500g

醛脫氫1家族成員A1(ALDH1A1)ALDH1A1 ELISA Kit鈣調(diào)磷B亞基B1抗體包裝100g

趨化因子C-X-C-基元受體4(CXCR4)CXCR4 ELISA Kit鈣調(diào)蛋白激激α抗體CaMKKα包裝25g

趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)CXCR3 ELISA Kit環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白H抗體包裝5g

趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)CXCL16 ELISA Kit磷化周期檢測點(diǎn)激1抗體包裝1g

趨化因子C-X3-C-基元受體1(CX3CR1)CX3CR1 ELISA Kit鈣激活蛋白12抗體包裝1g

趨化因子C-C-基元受體8(CCR8)CCR8 ELISA Kit20號(hào)染色體開放閱讀框134抗體包裝5g

趨化因子C-C-基元受體7(CCR7)CCR7 ELISA KitB粘附分子CD239抗體包裝100g

趨化因子C-C-基元受體1(CCR1)CCR1 ELISA Kit胰羧肽B2抗體包裝25g

趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)CCL3L1 ELISA Kit視網(wǎng)膜色變性蛋白26抗體包裝1g

趨化因子C-C-基元配體1(CCL1)CCL1 ELISA Kit過氧化物體肉堿?；D(zhuǎn)移抗體包裝25g

趨化(CHEM)CHEM ELISA Kit16號(hào)染色體開放閱讀框7抗體包裝5g

巰基硫轉(zhuǎn)移(MPST)MPST ELISA Kit16號(hào)染色體開放閱讀框57抗體包裝100mg

氫/鉀離子交換ATPβ肽(ATP4β)ATP4β ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框37抗體包裝1g

氫/鉀離子交換ATPα肽(ATP4α)ATP4α ELISA Kit3號(hào)染色體開放閱讀框49抗體包裝250mg

熱帶醋桿菌Acetobacter tropicalis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品腫瘤相關(guān)抗原試劑盒棕櫚;Palmitic acid

夏威夷鏈霉菌Streptomyces│hawaiiensis 質(zhì)量規(guī)格：純度>99,USP腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子試劑盒芝麻林;Sesamolin

生態(tài)館硝鹽還原菌Nitratireductor│aquibiodomus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品腫瘤壞死因子誘導(dǎo)基因6蛋白試劑盒 ;Levodopa
精子細(xì)胞BWW培養(yǎng)基儲(chǔ)存液Phospho-Glycogen synthase 1(Ser641)/FITC  熒光標(biāo)記化葡萄糖合成1IgG2,6-二叔丁對(duì) CP,98%

phospho-GSK3 Alpha/ Beta(alpha + beta)(phospho Tyr279 + Tyr216)/FITC  熒光標(biāo)記化葡萄糖合成激3α/βIgG烯利  >90.0%(HPLC)

GSK-3 Beta /FITC  熒光標(biāo)記糖原合激-3βIgG石墨 CP,99.85%

GSK-3 Beta(CT)/FITC  熒光標(biāo)記葡萄糖合成激-3βIgG水合聯(lián)氨  AR,80%溶液

p-GSK-3 Beta/FITC(phospho-Ser9)  熒光標(biāo)記化葡萄糖合成激-3βIgG三氧化鉬 AR,99.5%

phospho-GSK-3 Beta(Thr390) /FITC  熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化葡萄糖合成激3βIgG鉬 AR,85.0%

Phospho-GSK-3alpha (Ser21) /FITC  熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等化葡萄糖合成激-3αIgG高 CP,70.0-72.0%

GSR/GRase/FITC  熒光標(biāo)記還原IgG高 AR,70.0-72.0%

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。