對(duì)于基于半胱氨酸偶聯(lián)的ADC,若重輕鏈間二硫鍵連接上，重輕鏈之間則通過疏水相互作用連接，即使在非還原變性條件下，重輕鏈之間容易發(fā)生分離;若重鏈之間的兩對(duì)二硫鍵分別連接,同樣也容易發(fā)生分離。

反相色譜基于ADC不同組分疏水性的差異對(duì)各組分進(jìn)行分離,但是反相色譜填料對(duì)于蛋白有一定的變性作用，加之流動(dòng)相里存在有機(jī)溶劑及少量的有機(jī)酸，容易對(duì)ADC發(fā)生破壞作用,可以使重/輕鏈或重/重鏈發(fā)生分離,增加分析的難度。

IgGl具有4對(duì)鏈間二硫鍵,單抗通過部分還原使鏈間二硫鍵轉(zhuǎn)換成游離的半胱氨酸殘基，半胱氨酸殘基再與小分子連接形成了一-種包含0~8個(gè)復(fù)合抗體的混合物。二硫鍵還原后可產(chǎn)生2個(gè)游離巰基,可同時(shí)連接2個(gè),所以一般以偶數(shù)出現(xiàn),因此基于半胱氨酸偶聯(lián)的ADC一般來(lái)說為含有0,2,4,6或8個(gè)的混合物,其可能存在的形式如圖所示。

在儀器分析前，將ADC用巰基乙醇充分還原,ADC樣品則解離為0~1個(gè)的輕鏈以及帶有0~3個(gè)的重鏈,然后利用反相色譜可對(duì)各組分進(jìn)行分離。

PLRP-8色譜柱能夠輕松實(shí)現(xiàn)對(duì)ADC各個(gè)還原片段的分離,通過質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，對(duì)各峰進(jìn)行鑒定。通過紫外吸收光譜計(jì)算各峰的峰面積百分比，得到ADC的加權(quán)平均DAR. RP-HPLC 的方法沒有濃度鹽，不會(huì)對(duì)常規(guī)液相色譜造成污染，使用的是質(zhì)譜兼容的流動(dòng)相，能夠兼顧質(zhì)譜定性與液相定量計(jì)算DAR。此方法不可得到DAR,還可計(jì)算帶有不同數(shù)目的重輕鏈的比例,對(duì)于基于半胱氨酸偶聯(lián)ADC的DAR及分布分析具有意義。

按照偶聯(lián)于抗體的位點(diǎn)分類,ADC可分為基于賴氨酸和基于半胱氨酸偶聯(lián)2種用。IgG1抗體具有4對(duì)鏈間二硫鍵和12對(duì)鏈內(nèi)二硫鍵,一般來(lái)說，半胱氨酸偶聯(lián)技術(shù)只將偶聯(lián)至鏈間二硫鍵的巰基上。溫和的偶聯(lián)反應(yīng)可控制ADC的抗體偶聯(lián)比(drug antibody ratio, DAR)，因?yàn)镈AR是的質(zhì)控參數(shù),比例較低則降低。

相關(guān)產(chǎn)品：

CAB技術(shù)的Axl抗體偶聯(lián)-BA3011

力達(dá)霉素(LDM)與抗IV型膠原單抗3G11偶聯(lián)物

曲妥珠單抗修飾的紫杉醇脂質(zhì)納米粒

大腸埃希菌血清抗體與阿米卡星偶聯(lián)物

抗EGFR靶向-LA22單抗偶聯(lián)

靶向AXL的單克隆抗體以及抗體偶聯(lián)物

阿里他汀偶聯(lián)的抗EGFR抗體偶聯(lián)物制劑

兔抗DM1/4 pAb微管蛋白

抗EGFR的抗體-偶聯(lián)物anti-EGFR-MMAE

 基于PDL1抗體偶聯(lián)美登素(DM1)的ADC

Anti-HER3抗體偶聯(lián)小分子DM1

平陽(yáng)霉素與單克隆抗體fab′片段偶聯(lián)物

抗前列腺靶向GnRH-MTX偶聯(lián)物

抗TNFRSF8抗體偶聯(lián)單甲基奧瑞他汀E

人抗GPNMB抗體偶聯(lián)MMAE(單甲基奧瑞他汀E）

抗CD33IgG4κ抗體與加利車霉素偶聯(lián)物

抗CCT2單克隆抗體博來(lái)霉素A6偶聯(lián)物

單鏈抗體Sc Fv-SA3與抗阿霉素的偶聯(lián)物