FITC、羅丹明B、CY3/CY5熒光標(biāo)記多糖
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FITC、羅丹明B、CY3/CY5熒光標(biāo)記多糖
植物多糖具有的生物活性,由于多糖結(jié)構(gòu)中缺少發(fā)光基團(tuán),難以直接檢測(cè)。所以采用熒光物質(zhì)對(duì)多糖進(jìn)行標(biāo)記。FITC具有量子產(chǎn)率、長(zhǎng)、光和溫度系數(shù)低等,是目前應(yīng)用的熒光之一。
紅芪多糖(Hedysarum polybotys saccharide,HPS)具有、降血糖、提、抗骨質(zhì)疏松和抗纖維化等生物活性。利用紅芪多糖具有還原性末端的特點(diǎn),通過半縮醛基的還原胺化反應(yīng)引入仲氨基,進(jìn)而與FITC發(fā)生親核反應(yīng),實(shí)現(xiàn)多糖的熒光標(biāo)記。
HPS-3的熒光標(biāo)記:HPS-3溶于磷酸鹽緩沖液(PBS)中,依次加入Tyr,于37℃水浴反應(yīng)96h,得到HPS-3-Tyr。將HPS-3-Tyr溶于蒸餾水,用Na2CO2調(diào)節(jié)pH值,加FITC,室溫下避光反應(yīng)過夜,向反應(yīng)物中加入4倍量無水乙醇,有黃綠色沉淀析出,用水溶解沉淀,溶液上 Sephadex G-100柱純化,得到HPS-3-FITC。
FITC對(duì)紅芪多糖HPS-3進(jìn)行熒光標(biāo)記,其建立的體內(nèi)組織中定量分析方法和組織分布為進(jìn)一步研究紅芪多糖的作用機(jī)制和相關(guān)組學(xué)了基礎(chǔ)。
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