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小白鼠缺氧耐受形成中不同腦區(qū)一氧化氮水平的變化
本研究組的研究證實(shí)，在重復(fù)缺氧產(chǎn)生缺氧耐受過(guò)程中，小白鼠體內(nèi)通過(guò)某些機(jī)制的調(diào) 節(jié)，減少了全腦組織NO合成。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察小鼠在缺氧耐受形成中不同腦區(qū)NO水平的變化 ，旨在進(jìn)一步探討缺氧耐受產(chǎn)生的機(jī)制。
1 材料和方法
(1)試劑 4-Hydroxycoumarin(4-羥基香豆素，Sigma公司)，乙腈(中科學(xué)院上海腦 研所，上海腦海生物科技公司)。
(2)方法?、偃毖跄褪苣Ｐ汀∵x體重為(18～22)g昆明小白鼠雌雄不拘，隨機(jī)分組:正常 對(duì)照組、1次缺氧組、4次缺氧組(n=10～13)。1次缺氧組、4次缺氧組，按急性重復(fù)缺 氧方法，將小白鼠置于含有新鮮空氣、并經(jīng)過(guò)標(biāo)定的150 ml廣口瓶?jī)?nèi)，以橡皮塞密閉，記時(shí) ，一旦出現(xiàn)喘呼吸，立即取出，并隨即轉(zhuǎn)移到另一相似體積、含有新鮮空氣的廣口瓶?jī)?nèi)，密 閉，記時(shí)。依次類推四次，實(shí)驗(yàn)室溫度(20±2)℃。各次倒瓶中，從密閉開始到喘呼吸出 現(xiàn)時(shí)間為“原始耐受時(shí)間”，再依下式算出相當(dāng)于100 ml有效空氣量下的“標(biāo)準(zhǔn)耐受時(shí)間” 。②NO的測(cè)定 將缺氧1歡、4次及正常對(duì)照組小鼠斷頭處死，迅速取出腦組織，分離不
T:Standard tolerance time; t1：Time of begining asthma res
piration;
t0:Time of begining airtight time; V0:Bottle volume; W a:Mouse weight
同腦區(qū)，放入液氮中。建立NO測(cè)定方法。用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)相對(duì)熒光強(qiáng)度，用NaNO2 做標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果用pmol/mg濕重表示。
Tab.1 Standard tolerance time of mice exposed to hypoxia for run
one through run four (
±s,min,n=10)
| Group | Run exposed to hypoxia | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Run 1 | 12．2±2.2 | |||
| Run 4 | 12.6±4.3 | 26．3±10.4* | 38.6±15.8* | 56.3±10.5* |
| * P<0.05 compared with preceding run within group (3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用單因數(shù)方差分析檢驗(yàn)。 2 結(jié)果 (1)急性缺氧小白鼠的行為表現(xiàn) 小白鼠在各次急性重復(fù)缺氧時(shí)的行為表現(xiàn)與以前報(bào)道 相 似。 Tab.2 Contents of NO in encephalon,dien cephalo n,brain stem, cerebellum of |
| Brain area | Control | run | |
| 1 | 4 | ||
| encephalon | 60.991±7.640 | 132.78 3±15.313# # | 63.121±13.032* * |
| Diencephalon | 91.997±6.433 | 144.778±11.749# # | 104 .131±9.233* |
| Brain stem | 165.366±5.846 | 198.045±7.550# # | 188.055±6.475# |
| Cerebellum | 54.981±11.287 | 63.000±12.209 | 64.431±8.815[ BG)F] |
| * P<0.05,* * P<0.01 compared with run l;# P<0.05,# # P<0.01 compared with control 第1次缺氧過(guò)程中小白鼠煩躁不安，上下竄動(dòng)，呼吸淺快，逐漸發(fā)紺，后出現(xiàn)痙攣和 喘呼吸。第2次缺氧過(guò)程中，小白鼠自由活動(dòng)明顯減少，煩躁不安減輕，呼吸變慢,紫紺明顯 。第3、4次缺氧過(guò)程中，小白鼠紫紺更加嚴(yán)重，活動(dòng)更加減少，甚出現(xiàn)喘呼吸時(shí)，也不出 現(xiàn)煩躁不安?！ ?2)小白鼠1～4次重復(fù)缺氧的標(biāo)準(zhǔn)耐受時(shí)間(表1) 3 討論 尿素循環(huán)的中間產(chǎn)物L(fēng)-ARG(L-精氨酸)是NO合成的前體，在NO合成酶(NOS)作用下，ARG 先水解，再氧化成胍氨酸和NO。NOS是NO生物合成的關(guān)鍵。 家自然科學(xué)基資助項(xiàng)目，No.39670271 收稿日期：1999年7月19日；修回日期：2000年1月3日
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