上海慧穎生物科技有限公司

細(xì)胞活力檢測

時間:2015-5-26閱讀:3494

                                        細(xì)胞活力檢測

    在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力。由組織中分離細(xì)胞一般要檢查活力,以了解分離的過程對細(xì)胞是否有損傷作用;復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力,了解凍存和復(fù)蘇的效果。細(xì)胞懸液制備后,zui常用活體染料臺盼藍(lán)對細(xì)胞染色,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

    正常細(xì)胞胞膜完整,臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色;而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞胞膜通透性增加,臺盼藍(lán)能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色(藍(lán)色)。

操作步驟

1. 配制4%臺盼藍(lán)母液:稱取4g臺盼藍(lán),加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100mL,用濾紙過濾,4℃保存。使用時用PBS稀釋至0.4%。

2. 胰酶消化貼壁細(xì)胞,制備單細(xì)胞懸液,并作適當(dāng)稀釋(106 cells/mL)。

3. 取少量細(xì)胞懸液與0.4%臺盼藍(lán)溶液以9:1混合,輕輕吹打混勻,染色2~3min。

4. 顯微鏡下觀察,死細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大,無光澤;活細(xì)胞保持正常形態(tài),無色透明有光澤。若需計算活細(xì)胞率則將染色的細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。

活細(xì)胞率(%)= 活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100%

注意事項:臺盼藍(lán)染細(xì)胞時,時間不宜過長。否則,部分活細(xì)胞也會著色,會干擾計數(shù)的準(zhǔn)確性。

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