人CD152，人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4/CD152）ELISA試劑盒

目的：本試劑盒用于測定人血清，細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）含量。

原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）水平。用純化的人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4），再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）濃度。

組成成分：封板膜+密封袋+酶標(biāo)包被板+標(biāo)準(zhǔn)品+標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液+酶標(biāo)試劑+樣品稀釋液+顯色劑A液+顯色劑B液+終止液+濃縮洗滌液。

范圍：0.5 ng/mL -11ng/mL  

保存溫度：2-8℃

有效期：6個(gè)月

性能：樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上；批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

所需設(shè)備耗材：酶標(biāo)儀（通用）+洗板機(jī)（可無）+移液器+燒杯

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