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GP-73 ELISA
GP-73 ELISA ，即高爾基體蛋白 73（Golgi Protein 73，GP-73）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，是體外精準(zhǔn)定量檢測(cè)人體樣本中 GP-73 含量的專(zhuān)業(yè)工具，在肝臟疾病的診斷、病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估等方面意義重大。GP-73 是一種 Ⅱ 型跨膜糖蛋白，主要定位于高爾基體，在正常肝臟組織中表達(dá)水平較低，但在多種肝臟病變過(guò)程中，其表達(dá)會(huì)發(fā)生顯著變化。
在健康狀態(tài)下，肝臟細(xì)胞中 GP-73 參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)運(yùn)輸、糖基化修飾等基礎(chǔ)生理過(guò)程，維持細(xì)胞正常功能。然而，當(dāng)肝臟受到病毒感染（如乙肝、丙肝病毒）、酒精損傷、藥物毒性作用等，肝細(xì)胞受損，GP-73 表達(dá)上調(diào)。尤其在肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，GP-73 發(fā)揮著極為重要的作用。肝癌細(xì)胞的快速增殖和代謝異常，促使 GP-73 大量合成并釋放入血。研究表明，血清 GP-73 水平在肝癌患者中顯著升高，且與腫瘤大小、分期密切相關(guān)。相較于傳統(tǒng)肝癌標(biāo)志物甲胎蛋白（AFP），GP-73 在一些 AFP 陰性的肝癌患者中仍能保持較高陽(yáng)性率，因此聯(lián)合檢測(cè) GP-73 與 AFP，可有效提高肝癌早期診斷的準(zhǔn)確性，為患者爭(zhēng)取寶貴治療時(shí)機(jī)。在肝硬化、肝纖維化等慢性肝病進(jìn)程中，監(jiān)測(cè) GP-73 含量變化，有助于評(píng)估肝臟纖維化程度和疾病進(jìn)展，指導(dǎo)臨床治療方案調(diào)整，延緩病情惡化。
該試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)。核心組件為預(yù)包被有抗人 GP-73 單克隆抗體的微孔板。當(dāng)加入血清、血漿等生物樣本后，樣本中的 GP-73 會(huì)特異性地與包被抗體結(jié)合。結(jié)合反應(yīng)完成后，借助精心設(shè)計(jì)的洗板步驟，有效去除未結(jié)合的雜質(zhì)，為后續(xù)檢測(cè)營(yíng)造純凈環(huán)境。隨后，加入酶標(biāo)抗人 GP-73 抗體，其會(huì)與已結(jié)合在包被抗體上的 GP-73 進(jìn)一步結(jié)合，形成穩(wěn)定的抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。再次進(jìn)行洗板操作，徹di清除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，接著加入底物 A 和底物 B 啟動(dòng)顯色反應(yīng)。在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的催化作用下，底物發(fā)生反應(yīng)，顏色逐漸顯現(xiàn)，且顏色的深淺與樣本中 GP-73 的含量呈正相關(guān)。使用者借助酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），依據(jù)預(yù)先繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，即可精準(zhǔn)計(jì)算出樣本中 GP-73 的濃度。
試劑盒組成科學(xué)合理，包含預(yù)包被微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體、底物 A、底物 B、終止液、濃縮洗滌液以及樣本xi釋液等。從原材料的嚴(yán)格篩選采購(gòu)，到生產(chǎn)過(guò)程中的精細(xì)制作，再到成品的多輪嚴(yán)格檢驗(yàn)，每一個(gè)環(huán)節(jié)都層層把關(guān)，確保為使用者提供質(zhì)量穩(wěn)定、結(jié)果準(zhǔn)確的試劑盒。
在操作流程方面，血清樣本需自然凝固后離心取上清；血漿樣本則需使用合適抗凝劑處理后離心。合理設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，分別準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)品和經(jīng)過(guò)稀釋的樣本。將微孔板放入 37℃恒溫箱中溫育，使抗原抗體充分反應(yīng)。溫育結(jié)束后，洗板操作至關(guān)重要，務(wù)必保證洗滌充分，防止殘留物質(zhì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。加入酶標(biāo)抗體后再次溫育，由于底物對(duì)光敏感，在加入底物進(jìn)行顯色時(shí)，必須在避光條件下操作。顯色達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，加入終止液終止反應(yīng)，最后使用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。值得注意的是，不同批次的試劑盒組分嚴(yán)禁混用，整個(gè)操作過(guò)程必須嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以此保障檢測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。