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GP-ⅡbⅢa ELISA
GP-ⅡbⅢa ELISA ，即血小板膜糖蛋白 Ⅱb/Ⅲa（Platelet Membrane Glycoprotein Ⅱb/Ⅲa，GP-ⅡbⅢa）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，是用于體外精準(zhǔn)定量檢測(cè)人體樣本中 GP-ⅡbⅢa 含量的專業(yè)工具，在血栓性疾病診斷、抗血小板藥物療效監(jiān)測(cè)以及心血管疾病研究等方面具有重要意義。GP-ⅡbⅢa 是血小板表面含量最為豐富的整合素受體，在血小板聚集過程中扮演核心角色。
在正常生理止血過程中，當(dāng)血管受損暴露內(nèi)皮下膠原纖維時(shí)，血小板被激活，其表面的 GP-ⅡbⅢa 受體發(fā)生構(gòu)象改變，從非活化狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)?；罨?GP-ⅡbⅢa 能夠與纖維蛋白原等配體結(jié)合，在不同血小板之間形成 “橋梁"，從而使血小板相互聚集，最終形成血栓封堵破損血管，實(shí)現(xiàn)止血。然而，在血栓性疾病，如急性冠狀動(dòng)脈綜合征、腦梗死等情況下，血小板過度活化，GP-ⅡbⅢa 大量激活并介導(dǎo)血小板病理性聚集，導(dǎo)致血管堵塞，引發(fā)嚴(yán)重的心腦血管事件。通過檢測(cè)血漿中 GP-ⅡbⅢa 含量，能夠輔助診斷血栓性疾病，評(píng)估患者血栓形成風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，在抗血小板藥物治療過程中，如使用阿司/匹林、氯吡/格雷等藥物，監(jiān)測(cè) GP-ⅡbⅢa 水平變化，可有效評(píng)估藥物對(duì)血小板活性的抑制效果，指導(dǎo)臨床用藥劑量調(diào)整，提高治療安全性與有效性。此外，在心血管疾病發(fā)病機(jī)制研究中，GP-ⅡbⅢa 作為關(guān)鍵靶點(diǎn)，對(duì)深入了解疾病發(fā)生發(fā)展過程提供重要依據(jù)。
該試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)。核心組件為預(yù)包被有抗人 GP-ⅡbⅢa 單克隆抗體的微孔板。當(dāng)加入血漿等生物樣本后，樣本中的 GP-ⅡbⅢa 會(huì)特異性地與包被抗體結(jié)合。結(jié)合反應(yīng)完成后，借助精心設(shè)計(jì)的洗板步驟，有效去除未結(jié)合的雜質(zhì)，為后續(xù)檢測(cè)營造純凈環(huán)境。隨后，加入酶標(biāo)抗人 GP-ⅡbⅢa 抗體，其會(huì)與已結(jié)合在包被抗體上的 GP-ⅡbⅢa 進(jìn)一步結(jié)合，形成穩(wěn)定的抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。再次進(jìn)行洗板操作，徹di清除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，接著加入底物 A 和底物 B 啟動(dòng)顯色反應(yīng)。在辣根過氧化物酶（HRP）的催化作用下，底物發(fā)生反應(yīng)，顏色逐漸顯現(xiàn)，且顏色的深淺與樣本中 GP-ⅡbⅢa 的含量呈正相關(guān)。使用者借助酶標(biāo)儀在特定波長下測(cè)定吸光度（OD 值），依據(jù)預(yù)先繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可精準(zhǔn)計(jì)算出樣本中 GP-ⅡbⅢa 的濃度。
試劑盒組成科學(xué)合理，包含預(yù)包被微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體、底物 A、底物 B、終止液、濃縮洗滌液以及樣本xi釋液等。從原材料的嚴(yán)格篩選采購，到生產(chǎn)過程中的精細(xì)制作，再到成品的多輪嚴(yán)格檢驗(yàn)，每一個(gè)環(huán)節(jié)都層層把關(guān)，確保為使用者提供質(zhì)量穩(wěn)定、結(jié)果準(zhǔn)確的試劑盒。
在操作流程方面，血漿樣本需使用合適抗凝劑（如枸櫞/酸鈉）處理后離心獲取富含血小板血漿（PRP），再進(jìn)一步處理得到貧血小板血漿（PPP）用于檢測(cè)。合理設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，分別準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)品和經(jīng)過稀釋的樣本。將微孔板放入 37℃恒溫箱中溫育，使抗原抗體充分反應(yīng)。溫育結(jié)束后，洗板操作至關(guān)重要，務(wù)必保證洗滌充分，防止殘留物質(zhì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。加入酶標(biāo)抗體后再次溫育，由于底物對(duì)光敏感，在加入底物進(jìn)行顯色時(shí)，必須在避光條件下操作。顯色達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，加入終止液終止反應(yīng)，最后使用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。值得注意的是，不同批次的試劑盒組分嚴(yán)禁混用，整個(gè)操作過程必須嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，以此保障檢測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。
