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福爾根DNA染色液 操作指導(dǎo)
最近更新時(shí)間：2016-5-12
提 供 商：北京諾博萊德科技有限公司資料大?。?/span>7.5KB
文件類型：JPG 圖片下載次數(shù)：121次
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產(chǎn)品簡介：
脫氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基綠-派洛寧法、吖啶橙熒光法等，其中zui經(jīng)典的是Feulgen法,該法是一種經(jīng)典的酶組織化學(xué)法。
NobleRyder Feulgen Stain 原理在于DNA經(jīng)溫和的弱酸(例如鹽酸)水解后，嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開，并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。醛基在原位與 Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色化合物，使細(xì)胞內(nèi)含有DNA的部位呈紫紅色。紫紅色的產(chǎn)生是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)有醌基(醌基是一個(gè)具有顏色的發(fā)色團(tuán)，所以凡含有DNA的部位就呈紫紅色。該水解作用不影響核糖-嘌呤結(jié)合鍵，因此RNA用此法處理后則分解，所以該法不適用于證明RNA。
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | D6610 3×50ml | Storage | ||
試劑(A):Schiff Reagent | 50ml | 4℃ 避光 | ||
試劑(B): SO2水 | B1:弱酸溶液 | 50ml | RT | |
B2:亞硫酸鹽溶液 | 50ml | RT | ||
使用說明書 | 1份 | |||
自備材料：
1、蒸餾水、
2、恒溫箱
操作步驟(僅供參考)：
(一)石蠟切片染色：
1、組織固定：Carnoy固定石蠟切片較好，10%福爾馬林亦可，不宜采用Bouin固定液。
2、配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸餾水=1:4配制，即取1份弱酸溶液、4份蒸餾水，充分混合，即獲得弱酸工作液。
3、石蠟切片脫蠟至蒸餾水。
4、入弱酸工作液，室溫浸洗一下。
5、切片入預(yù)熱至60℃的弱酸工作液，孵育8min。
6、切片入室溫的弱酸工作液中沖洗1min。
7、蒸餾水沖洗。
8、切片入Schiff Reagent，室溫避光染色30~60min。
9、在上述染色過程中，配制SO2水工作液。按弱酸溶液:亞硫酸鹽溶液:蒸餾水=1:5:94 配制，即取弱酸溶液1份、亞硫酸鹽溶液5份、蒸餾水94份，充分混合，即配即用。
10、用新鮮配制的SO2水工作液洗切片3次，每次90s。
11、蒸餾水中洗凈。經(jīng)系列乙醇脫水。二甲苯透明并封片。
(二)冰凍切片染色：
1、冰凍切片預(yù)處理：取1份乙酸、3份無水乙醇混合即為固定液，固定10min。
2、由無水乙醇脫水--逐級下行—蒸餾水。
3、配制弱酸工作液：按弱酸溶液:蒸餾水=1:4配制，即取1份弱酸溶液、4份蒸餾水，充分混合，即獲得弱酸工作液。
4、余下步驟同上述石蠟切片染色。
染色結(jié)果：
細(xì)胞核內(nèi)DNA | 紅紫色 |
陰性對照：將同樣切片經(jīng)上述步驟，只有步驟5改為入室溫弱酸工作液，孵育15min。結(jié)果為細(xì)胞核DNA陰性。
注意事項(xiàng)：
1、水解時(shí)間很重要，并且應(yīng)使用恰當(dāng)?shù)墓潭〞r(shí)間。不同的固定液水解時(shí)間不一樣。
固定液 | 水解時(shí)間(min) |
Carnoy 固定液 | 8min |
Helly 固定液 | 8min |
Susa 固定液 | 18min |
8min | |
Zenker 液 | 5min |
2、注意Schiff Reagent的純凈程度，若變淺粉紅亦可考慮使用，顏色變紅則棄用。
3、去除切片上多余Schiff Reagent的方法以SO2水洗為好。
4、應(yīng)做陰性對照試驗(yàn)。
有效期：6個(gè)月有效。