T4DNA連接酶 NEB M0202V

T4DNA連接酶 NEB M0202V
1.特性
■ 高效連接粘性末端和平末端
■ T/A 克隆
■ dsDNA 切刻修復(fù)
■ 構(gòu)建高豐度克隆文庫(kù)
■ RNA 和 DNA 的連接
2.概述
該酶催化雙鏈 DNA 或 RNA 上相鄰的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接，還可以修復(fù)雙鏈 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交雙鏈中

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T4DNA連接酶 NEB M0202V

1.特性

■  高效連接粘性末端和平末端
■  T/A 克隆
■  dsDNA 切刻修復(fù)
■  構(gòu)建高豐度克隆文庫(kù)
■  RNA 和 DNA 的連接

2.概述

該酶催化雙鏈 DNA 或 RNA 上相鄰的 5´-磷酸末端和 3´-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接，還可以修復(fù)雙鏈 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。

3.來(lái)源

純化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

4.反應(yīng)條件

1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液
[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl₂，10 mM DTT，1 mM ATP]。推薦 DNA 5´ 末端濃度為 0.1-1.0 μM，16℃ 溫育。
熱失活：65℃ 10 分鐘。

5.質(zhì)保聲明

T4 DNA 連接酶經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)，確保該產(chǎn)品具有zui高的活性和純度。

6.單位定義（粘性末端活性單位）

1 單位指在 20 μl 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液中，16℃ 反應(yīng)條件下，30 分鐘能使 50% 的經(jīng) HindⅢ 消化的λDNA [ 5´ 端濃度為 0.12 μM（300 μg/ml）] 連接所需的酶量。

濃度

400,000 units/ml 和 2,000,000 units/ml。

7.注意事項(xiàng)

與 E. coli DNA 連接酶需要 NAD+ 作輔因子不同，T4 DNA 連接酶的輔因子是 ATP。
稀釋后的 T4 DNA 連接酶應(yīng)于 -20℃、50% 甘油貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001）中保存。如稀釋后馬上使用，也可用 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液稀釋。
只要在反應(yīng)體系中補(bǔ)加 1 mM ATP，連接反應(yīng)就可以在 NEB 提供的四種限制性內(nèi)切酶緩沖液或在T4 DNA 多聚核苷酸激酶反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行。

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