P2804NobleRyder 雙縮脲蛋白定量試劑盒

       雙縮脲蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品簡介：

雙縮脲是一種用于分析蛋白質(zhì)的方法，雙縮脲反應(yīng)的原理是在呈藍色的堿性硫酸銅溶液存在的情況下，銅離子與肽鍵形成有色螯合的銅復合物，呈紫色。所產(chǎn)生的顏色密度與參與反應(yīng)肽鍵數(shù)成比例。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。雙縮脲法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，但易受銅離子螯合劑影響，另外，對于血清總蛋白的雙縮脲分析，膽紅su、脂類、血紅蛋白、葡聚糖具有一定干擾作用。雙縮脲法在10～160mg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

NobleRyder 雙縮脲蛋白定量試劑盒 

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.酶標儀或分光光度計

2.96孔板或離心管

操作步驟(僅供參考)：

1.取1ml蛋白標準配制液或稀釋液加入到蛋白標準(BSA)中，充分溶解后配制成160mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標準溶液應(yīng)-20℃保存。特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。
2.例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白標準溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。

3.將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的標準品孔，加稀釋液補足至20μl。

4.加適當體積待測蛋白樣本到96孔板的樣品孔中。如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測蛋白樣本孔中加入20μl稀釋液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋白樣本孔中加入20μl稀釋液。

5.各孔加入200μl雙縮脲試劑, 室溫放置10～15min。

6.測定540nm波長處的吸光值，如無540nm，520～562nm之間的波長也可。

7.根據(jù)標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。

注意事項：

1、 蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白標準配制液后，即獲得蛋白標準原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標準原液-20℃長期保存。

2、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。

3、 待測蛋白和蛋白標準加入雙縮脲試劑后，如果發(fā)現(xiàn)檢測效果不佳，可以室溫放置1h或60℃放置15min，顏色會隨著時間的延長不斷加深。顯色反應(yīng)也會隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當延長孵育時間或在較高溫度下孵育。

4、 測定標準曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，可能的原因是樣品中含有銅離子螯合劑。

5、 建議每次測定時都做標準曲線。因為顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。

6、 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積。應(yīng)按比例適當加大雙縮脲試劑的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。

7、 檢測中發(fā)現(xiàn)所有孔都呈暗紫色，可能原因是樣品含有還原劑，應(yīng)適當透析或稀釋樣品。

8、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 6個月有效。蛋白標準配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。

NobleRyder 雙縮脲蛋白定量試劑盒