徠卡DM1000熒光顯微鏡用什么染料較好

徠卡DM1000熒光顯微鏡用什么染料較好

徠卡DM1000熒光顯微鏡用什么染料較好

       它可對(duì)細(xì)胞中的DNA和RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。EB:染色DNA和RNA熒光素雙醋酸酯(FDA)：FAD 本身無(wú)熒光,無(wú)極性,可透過(guò)完整的原生質(zhì)膜。 一旦進(jìn)入原生質(zhì)體后,由于受到酯酶分解而產(chǎn)生 具有熒光的極性物質(zhì)熒光素。它不能自由出入原 生質(zhì)膜,因此有活力的細(xì)胞能產(chǎn)生熒光,無(wú)活力 的原生質(zhì)體不能分解FAD無(wú)熒光產(chǎn)生。5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下貯存,使用 時(shí)取0.22mlFDA貯存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用時(shí),使終濃度為0.01%。

       熒光染料Ho33342和若丹明123: 活細(xì)胞雙熒光染色觀察細(xì)胞核和線粒體。一般的生物染料不能穿透細(xì)胞膜，只有當(dāng)細(xì)胞被固定后改變了細(xì)胞膜的通透性，染料才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。但有些活體染料能進(jìn)入活細(xì)胞，并對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生毒性作用。熒光染料Ho33342和若丹明123都是活體染料。Ho33342能與細(xì)胞中DNA進(jìn)行特異的結(jié)合，若丹明123能與線粒體進(jìn)行特異的結(jié)合。采用兩種熒光染料的混合染液可對(duì)一個(gè)活細(xì)胞的核和線粒體同時(shí)染色。 

 熒光組化實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題 

1．每種熒光染料，均有自己的適PH值，此時(shí)熒光強(qiáng)。當(dāng)pH改變時(shí)，不僅熒光強(qiáng)度減弱，而且波長(zhǎng)將有所改變，因此熒光檢測(cè)時(shí)要在一定的PH值的緩沖液中進(jìn)行。 

2．一放熒光染色在20。C以下時(shí)熒光比較穩(wěn)定，溫度升高常出現(xiàn)溫度猝滅。 

3．在熒光觀察中，常因激發(fā)光的增強(qiáng)而使樣品熒光很快衰竭，造成觀察和照相困難。為此用能量小的長(zhǎng)波長(zhǎng)光進(jìn)行觀察，需照相時(shí)再適當(dāng)增強(qiáng)激發(fā)光。 

4．一般熒光染液的濃度在萬(wàn)分之一以下，甚億萬(wàn)分之一，也能使標(biāo)本著色。在一定的限度內(nèi)，熒光強(qiáng)度可隨熒光素的濃度增加而增強(qiáng)，但超過(guò)限度，熒光強(qiáng)度反而下降，這是由于熒光分子間的締合而使自身熒光猝滅所致。