PerkinElmer唾液樣品優(yōu)化方案之利器—珠磨均質(zhì)器

日前來自美國佐治亞州奧古斯塔大學(xué)Augusta University的多位科學(xué)家利用PerkinElmer的SAR-CoV-2檢測方案對來多個自醫(yī)療機構(gòu)和社區(qū)收集到的429份對應(yīng)的鼻咽拭子和唾液樣品進行檢測，以分析唾液樣品、鼻咽拭子的檢測效果，以及利用唾液樣品檢測優(yōu)化方案后的檢測效果。

樣本處理和SARAS-CoV-2分析工作流程示意圖概述：對在醫(yī)療機構(gòu)和社中采集的對應(yīng)鼻咽拭子和唾液樣本進行測試和驗證。1、U方案：使用U方案對鼻炎拭子或唾液樣本進行SARS-CoV-2檢測流程（唾液樣品不經(jīng)過均質(zhì)，直接用于RNA提?。?；2、SalivaAll方案：使用SalivaAll方案對唾液樣本進行核酸檢測流程（在唾液樣品提取RNA之前利用珠磨機均質(zhì)器進行唾液均質(zhì)化步驟）；3、SalivaAll混樣方案：唾液樣本均質(zhì)后按5:1進行混樣，然后進行RNA提取、RT-PCR檢測。

U方案通過RT-PCR檢測240個對應(yīng)的鼻咽拭子和唾液樣本的SARS-CoV-2。結(jié)果顯示 28.3%（68/240）的樣本從唾液、鼻咽拭子或兩者中檢測出SARS-CoV-2陽性。唾液中的檢出率50.0%（34/68）低于鼻咽拭子的檢出率89.7%（61/68）。

SalivaAll方案對189個對應(yīng)的鼻咽拭子和唾液樣本進行了檢測，在提取RNA之前利用BeadBoost珠磨均質(zhì)器對唾液樣品進行樣本均質(zhì)化步驟，然后進行核酸提取、RT-PCR。結(jié)果顯示，50.2%（95/189）的樣本從唾液、鼻咽拭子或兩者中檢測出SARS-CoV-2陽性。唾液中SARS-CoV-2的檢出率97.8%（93/95）高于鼻咽拭子檢出率78.9%（75/95）。

U方案與SalivaAll方案比較：對U方案檢測的85份唾液樣本用SalivaAll方案再次進行檢測，對兩種方案進行評估。在兩種方案評估的85份唾液樣本中，57.6%（49份）的SARS-CoV-2檢測呈陽性，在U方案、SalivaAll方案或兩者皆有。唾液樣品SalivaAll方案的檢出率為100%（49/49），而U方案的檢出率為36.7%（18/49）。

SalivaAll混樣方案根據(jù)FDA5:1的混樣建議，分別利用1個陽性樣品和4個陰性樣品混成陽性混樣，利用5個陰性樣品混成陰性混樣。陽性混樣和陰性混樣各混20個樣品。利用SalivaAll混樣方案，唾液樣本均質(zhì)后每個樣品取60ul進行混樣，5個樣品總體積為300ul混樣，然后進行RNA提取、RT-PCR檢測。結(jié)果顯示，20個陽性混樣的檢測準(zhǔn)確性為95%，陰性混樣的檢測準(zhǔn)確性為100%。

研究表明傳統(tǒng)的SARS-CoV-2核酸檢測流程在唾液樣本的操作和檢測靈敏度等方面具有一定的挑戰(zhàn)。通過PerkinElmer優(yōu)化的唾液樣品檢測方案，在RNA提取之前加上唾液樣品均質(zhì)處理步驟，檢測結(jié)果靈敏性大幅提升，檢測靈敏度高于鼻咽拭子，同時可以對唾液樣品進行混樣檢測。