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一、熱原(progon)醫(yī)院臨床在使用藥品注射劑時，常有發(fā)生冷感、寒戰(zhàn)、發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、膚色灰白、休克、嚴重時導致死亡，這種癥狀稱為熱原反應(yīng)。為提高藥品質(zhì)量和用藥安全，人們對熱原進行了廣泛的研究，直到1923年Seibert提出了用家兔檢測熱原的方法。在1942年美國藥典首先將家兔熱原檢查項收入藥典成為法定方法，中國藥典1953年版開始收載該方法，隨后的世界各國藥典都以動物熱原檢查法作為藥品質(zhì)量監(jiān)測的方法之一。家兔熱原檢查法的優(yōu)點，可在規(guī)定時間里觀察到家兔的體溫變化，相應(yīng)反應(yīng)了熱原質(zhì)引起
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細菌內(nèi)毒素，英文稱作Enolotoxin，是G-菌細胞壁個層上的*結(jié)構(gòu)，內(nèi)毒素為外源性致熱原，它可激活中性粒細胞等，使之釋放出一種內(nèi)源性熱原質(zhì)，作用于體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱。內(nèi)毒素的主要化學成分為脂多糖中的類脂A細菌內(nèi)毒素這個概念在1890年的時候就已被提了出來，它是在研究發(fā)熱物質(zhì)過程所引成的，1933年Boivinzui先由小鼠傷寒桿菌提取出來，進行化學免疫學方面的研究，到1940年時候，Morgan使用志賀氏痢疾菌闡明了細菌內(nèi)毒素是由多糖脂質(zhì)及蛋白質(zhì)三部分所組成的復(fù)合體，到了1950年以后，隨
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實驗原理帶電荷的蛋白質(zhì)，在電場中向著與其所帶電荷電性相反的電極泳動稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)的等電點不同，但大都在pH7以下，若將血清置于pH8.6的緩沖液中，則這些蛋白質(zhì)均帶負電，在電場中都向陽極移動。由于各種蛋白質(zhì)在同一pH環(huán)境中所帶負電荷多少及分子大小不同，所以在電場中向陽極泳動速度也不同。蛋白質(zhì)分子小而帶電荷多者，泳動速度快；反之，則泳動速度慢。因此可將血清蛋白質(zhì)依次分為清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五條區(qū)帶，經(jīng)染色可計算出各血清蛋白質(zhì)含量的百分數(shù)。以醋酸纖維薄
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實驗試劑TotalRNAKit：Omega：(Cat.No．R6834)FirstStrandcDNASynthesisKit：GeneCopoeia(Cat.No．C0210A)2xAllinOneTMQ-PCRMix：GeneCopoeia（cat.No．D0101A)Primersynthesis：invitrogen實驗設(shè)備RealTimePCR：ABI實驗材料樣品為5個人源的細胞培養(yǎng)液，其編號分別為：NO.I、No.2、No.3、No.4、No.5，其中為對照組，其它四個為不同的樣品組
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實驗原理1.DNA段回收方法：DN片段在適當濃度的瓊脂糖凝膠中，通上一定電壓進行電泳，不同大小的DNA分子由于遷移率的不同而分離開。切下帶有所需DN片段的凝膠，用凍融法、玻璃奶回收法或商品化膠回收試劑盒將目的片段回收純化。2.利用Taq酶能夠在PCR產(chǎn)物的3’末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體，在連接酶作用下，可以把PCR產(chǎn)物插入到質(zhì)粒載體的多克隆位點，可用于PCR產(chǎn)物的克隆和測序。實驗試劑1.pMDTM18-TSimpleVectorKit(Takara公司)2.
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實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發(fā)DNA聚合反應(yīng)(即錯配)，再次引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)。引物設(shè)計應(yīng)注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30bp，常用的是18-27bp。2．引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當沒有相似性較高，尤其是3’端相似性較高的序列，否則容易導致錯配。引物3’端出現(xiàn)3個以上的連續(xù)堿基，如GGG或CCC，也會使錯誤引發(fā)機率增加。3．引物3’端的末位堿基對Taq酶的DNA合成效率有較大的影響。不同的末位堿基在錯配位置導致不同的擴增
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大腸桿菌亮氨酞-tRNA合成酶的E292對氨基酞化活性的作用
實驗試劑1.L-Leucine，ATP，DTT，焦磷酸鈉(tetrasodiumpyrophosphate)和HA-Ultrogel購自美國Sigma公司。2.[32p]-焦磷酸鈉購自美國杜邦公司。3.L-[I4C]-亮氨酸和DEAE-SepharoseTMFastFlow購自英國Amersham公司。4.限制性內(nèi)切酶和T4DNA連接酶購自立陶宛MBIFerments公司。5.質(zhì)粒pTrc-99B。實驗材料大腸桿菌LeuRS從高表達大腸桿菌菌株中純化得到實驗步驟1.突變體LeuRS基因的構(gòu)建以構(gòu) -
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