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  • 生物化學技術專題:微生物的糖發(fā)酵

    一、單糖發(fā)酵試驗(一)、實驗原理單糖發(fā)酵是將葡萄糖,乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內,使其zui終濃度為0.75~1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管,制成單糖發(fā)酵管,接種細菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18~24小時,若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃,若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成,小倒管內則聚集有氣泡;不分解,則指示劑不變色。(二)、實驗材料1.菌種:大腸桿菌,傷寒桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。2.培養(yǎng)基:葡萄糖發(fā)酵管,乳糖發(fā)酵管等。(三)實驗方法1.將傷寒桿菌,大腸桿菌按照液體接種方法分
  • 蛋白質技術專題:細胞凋亡的幾種檢測方法

    一、形態(tài)學觀察方法1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有“出芽”現(xiàn)象。2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。3、臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區(qū)別壞死細胞有一定的幫助。4、透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨
  • 蛋白質技術專題:核蛋白的免疫熒光定位實驗

    標簽:核蛋白免疫熒光定位免疫熒光技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發(fā)展zui早的一種免疫熒光技術。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。實驗方法免疫熒光定位法實驗方法原理免疫熒光細胞化學技術是采用熒光素標記的已知抗體(或抗原)作為探針,檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原(或抗體),形成的抗原抗體復合物帶有熒光素,在熒光顯微鏡下,由于受高壓汞燈光源的紫外光照射,熒光素發(fā)出明亮的熒光,這樣就可以分辨出抗原(或抗體)的所在位置及其性質,并可利用熒光定量技術計算抗原的含量,以達
  • 蛋白質技術專題:ELISA的操作要點

    的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內醫(yī)學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點,珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特殊儀器配合應用,兩者均有詳細的使用說明,嚴格遵照規(guī)定操作,必能得出準確的結果。一、標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血
  • 蛋白質技術專題:凝膠過濾層析實驗

    標簽:凝膠過濾層析凝膠過濾層析(gelfiltrationchromatography)法又稱排阻層析或分子篩方法,主要是根據(jù)蛋白質的大小和形狀,即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結構物質,多是交聯(lián)的聚糖類物質,使蛋白質混合物中的物質按分子大小的不同進行分離。實驗方法蛋白質的凝膠過濾分離實驗材料蛋白質試劑、試劑盒凝膠過濾緩沖液儀器、耗材布氏漏斗凝膠過濾層析柱分光光度計實驗步驟1.如果凝膠過濾的介質是干粉,則需在凝膠過濾緩沖液中*溶脹。2.在遠離過往通道及直接光照的恒
  • 蛋白質技術專題:蛋白質的電轉實驗

    標簽:蛋白質電轉很多膜可作為蛋白質電轉移的固相支持物,如重氮化纖維素膜(DPT,DBM)、DEAE-纖維素膜、尼龍膜等,但用的zui多的還是硝酸纖維素膜(NC膜),該膜與蛋白質以非共價的疏水作用形式結合,結合能力約為80μg/cm2。實驗方法基本方案實驗材料蛋白質試劑、試劑盒轉移緩沖液甲醇電極緩沖液儀器、耗材電轉移槽電泳儀實驗步驟1.剪6塊3MM濾紙和一塊NC膜。2.將剪好的3MM濾紙和NC膜在轉移緩沖液中浸泡3-5分鐘。3.按下列過程安裝轉移裝置,將塑料支架平放在含轉移緩沖液的托盤中,在塑料支
  • 蛋白質技術專題:蛋白質回收實驗

    標簽:蛋白質回收試驗,是“對照試驗”的一種。當所分析的試樣組分復雜,不*清楚時,向試樣中加入已知量的被測組分,然后進行測定,檢查被加入的組分能否定量回收,以判斷分析過程是否存在系統(tǒng)誤差的方法。所得結果常用百分數(shù)表示,稱為“百分回收率”,簡稱“回收率”。實驗方法基本方案實驗材料蛋白質試劑、試劑盒SDSDTT脫色液染色液儀器、耗材電泳儀透析膜實驗步驟1.凝膠浸泡在染色液中于室溫緩慢搖動染色15~20min,然后移至脫色液中于4℃溫和搖動下脫色2~3h。2.切下染色后的凝膠條帶,于4℃水中浸泡2~3h
  • 蛋白質技術專題:谷胱甘肽-S-轉移酶活性測定

    谷胱甘肽S-轉移酶是指催化具有親電取代基的外源性化合物與內源的還原谷胱甘肽(GSH)反應的酶??纱呋喾N反應包括烴基、芳基、芳烴基、烯基和氧基的轉移反應。谷胱甘肽S-轉移酶是谷胱甘肽結合反應的關鍵酶,催化谷胱甘肽結合反應的起始步驟,主要存在于胞液中。谷胱甘肽S-轉移酶有多種形式,根據(jù)作用底物不同,至少可分為下列5種:1、谷胱甘肽S-烷基轉移酶:催化烷基鹵化物和硝基烷類化合物的谷胱甘肽結合反應。主要存在于肝臟和腎臟。2、谷胱甘肽S-芳基轉移酶:主要催化含有鹵基或硝基的芳烴類或其它環(huán)狀化合物的谷胱甘
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