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實(shí)驗(yàn)原理經(jīng)過(guò)抗體測(cè)定的陽(yáng)性孔，可以擴(kuò)大培養(yǎng)，進(jìn)行克隆，以得到單個(gè)細(xì)胞的后代分泌單克隆抗體?？寺〉臅r(shí)間一般說(shuō)來(lái)越早越好。因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長(zhǎng)，互相爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒(méi)和淘汰的可能。但克隆時(shí)間也不宜太早，太早細(xì)胞性狀不穩(wěn)定，數(shù)量少也易丟失。克隆化的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過(guò)一段時(shí)期培養(yǎng)之后，也還會(huì)因?yàn)榧?xì)胞突變或特定染色體的丟失，使部分細(xì)胞喪失產(chǎn)生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)?？寺』螖?shù)的多少由分泌能力強(qiáng)弱和抗原的免疫性強(qiáng)弱而決定。一般說(shuō)，免疫性強(qiáng)的抗原克
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實(shí)驗(yàn)原理1.離心柱結(jié)構(gòu)：特殊硅基質(zhì)吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質(zhì)穿過(guò)。在正常情況下，核酸表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了核酸表面親水薄膜的相對(duì)有序排列，形成了疏水環(huán)境。在此環(huán)境中，核酸與硅膠膜能有效結(jié)合，而蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他污染物則不能結(jié)合。2.堿變性抽提的原理是在pH高于12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，破壞了堿基配對(duì)，導(dǎo)致雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性，但閉環(huán)的質(zhì)粒DNA鏈由于處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)而不能彼此分開。當(dāng)pH調(diào)至中性時(shí)，
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實(shí)驗(yàn)原理利用轉(zhuǎn)化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質(zhì)粒的菌落克隆。再?gòu)倪@些菌落中鑒定出質(zhì)粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。實(shí)驗(yàn)試劑1.LB培養(yǎng)基(加抗菌素)2.PCR用試劑3.引物4.質(zhì)粒提取用試劑5.酶切需要的限制性內(nèi)切酶及其緩沖液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/LMgSO4，0.025mol/LTris-HClpH8.0)。6.100mg/ml氨芐青霉素實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.旋渦混合器2.小鑷子3.微量移液取樣器4.移液器吸頭5.1.5ml微量離心管6.雙面微量離心管架7.干式恒溫氣浴
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實(shí)驗(yàn)原理免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行定位測(cè)定的技術(shù)?？乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由漿細(xì)胞針對(duì)特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。熒光素標(biāo)記的稱為免疫熒光法（immunofluorescenttechnique），常用的螢光素有異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothioc
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小鼠胸腺細(xì)胞增殖3H-TdR摻入法檢測(cè)IL-1的生物活性
實(shí)驗(yàn)試劑1.75%酒精2.5%FCS-RPMI-1640*培養(yǎng)液與RPMI-1640*培養(yǎng)液3.ConA或PHA4.IL-1標(biāo)準(zhǔn)品：倍比稀釋成至少6個(gè)不同濃度值。實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.3H-TdR、β-液閃汁數(shù)儀，微量細(xì)胞收集儀2.解剖刀、剪、單皿、研磨工具(玻璃勻漿器，不誘鋼網(wǎng)或者毛玻璃片，用于研磨小鼠胸腺)3.96孔細(xì)胞培養(yǎng)板4.刻度吸管，毛細(xì)吸管，刻度離心管、離心機(jī)、細(xì)胞計(jì)數(shù)板，倒置顯微鏡，加樣器(頭)，50%CO2培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)實(shí)驗(yàn)材料1.小鼠：BALB/C或C57BL/6小鼠，6-10周齡， -
大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膽囊收縮素（CCK）含量的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)試劑1.大鼠膽囊收縮素(CCK)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)2.蒸餾水實(shí)驗(yàn)設(shè)備1.37℃恒溫箱2.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀3.精密移液器及一次性吸頭4.一次性試管5.吸水紙實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。2.配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3.加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋 -
實(shí)驗(yàn)步驟一、抗原的提取抗原的制備是一件十分細(xì)致的工作，要制備一個(gè)高純度的抗原，需要付出艱巨的努力，制備工作涉及物理學(xué)、化學(xué)和生理學(xué)等許多領(lǐng)域的知識(shí)。根據(jù)物理或化學(xué)特性建立起來(lái)的分離、純化方法的主要原理不外乎科二個(gè)方面：①利用混合物中幾個(gè)組分分配率的差別將他們分配到可用機(jī)械方法分離的兩或幾個(gè)物相中，如鹽析、有機(jī)溶劑抽提、層析和結(jié)晶等；②把混合物置于單一物相中，通過(guò)物理力場(chǎng)的作用使各組分分配于不同的區(qū)域而達(dá)到分離的目的，如電泳、超速離心和超濾等。由于組織細(xì)胞內(nèi)存著許多分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同的抗原物質(zhì)
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實(shí)驗(yàn)原理染色體顯帶（Banding）技術(shù)是一種用染料對(duì)染色體進(jìn)行分化染色的方法。就是將染色體經(jīng)酸、堿、溫度等處理后，再以染料染色，或單用某些熒光染料就可以染出深淺不同或明暗各異的帶紋的縱向結(jié)構(gòu)。此項(xiàng)技術(shù)發(fā)明于本上世紀(jì)六十年代末、七十年代初，發(fā)展至今已是非常成熟。1971年在巴黎召開第四次人類遺傳學(xué)會(huì)議上制定了人類染色體識(shí)別的統(tǒng)一體制，訂出了各條染色體分帶的寬窄、位置和名稱；1981年又公布了《人類細(xì)胞遺傳學(xué)高分辨率顯帶命名體制》，這些規(guī)定目前為世界各國(guó)學(xué)者所普遍采用。在我國(guó)，染色體顯帶工作起步于
