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中級(jí)會(huì)員·14年您現(xiàn)在的位置： 首頁> 公司動(dòng)態(tài)> DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：生物素酰化探針的制備實(shí)驗(yàn)
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標(biāo)簽： 生物素 酰化 探針
在標(biāo)準(zhǔn)的切口平移實(shí)驗(yàn)體系中，生物素-11-dNTP取代了dNTP，DNA酶I 的濃度調(diào)整到可生成長(zhǎng)100~500個(gè)核苷酸的范圍，其他生物素?；暮塑账嵋部纱嫔锼?11-dNTP。
實(shí)驗(yàn)方法
- 切口平移法
- 隨即寡核苷酸引物合成法
| 實(shí)驗(yàn)材料 | DNA |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | DNA聚合酶 dNTP 2-疏基乙醇 生物素 NaCl EDTA SDS 無水乙醇 |
| 儀器、耗材 | 注射器 電泳儀 離心機(jī) 培養(yǎng)箱 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 混合以下物質(zhì)于100 μl 反應(yīng)體積：
3. 加樣于瓊脂糖凝膠，同時(shí)帶對(duì)照分子量標(biāo)準(zhǔn)，在15 V/cm 電壓降下電泳。
4. 消化的DNA大小介于100~500 bp 之間，接步驟5繼續(xù)，若大小在500~1 000核苷酸之間（或更大）加入第二份DNA酶Ⅰ繼續(xù)溫育。
5. 加入2 μl，0.5 mol/l pH8.0的EDTA和1 μl 10%SDS，68℃加熱10 min 終止反應(yīng)和滅活DNA酶Ⅰ。
6. 在1 ml 注射器中準(zhǔn)備如Sephadex G-50離心柱，用2 ml 無水乙醇清洗注射器和硅化的玻璃棉。
9. 用比色法估計(jì)生物素酰化反應(yīng)的程度和探針的質(zhì)量或進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。 |
