本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），測(cè)定樣品中人NOD樣受體（NLR）的水平。向預(yù)先包被人胃泌素(Gastrin)抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的人NOD樣受體（NLR），經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的組分，然后再加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人NOD樣受體（NLR）的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成

1	標(biāo)準(zhǔn)品（100pg/ml）	0.5ml	7	顯色劑A液	6ml
2	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	6mL	8	顯色劑B液	6ml
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	9	終止液	6ml
4	酶標(biāo)試劑	6ml	10	說明書	1份
5	20×濃縮洗滌液	25ml	11	封板膜	2張
6	樣品稀釋液	6ml	12	密封袋	1個(gè)

注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml

需要而未提供的試劑和器材

37℃恒溫箱。
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
精密移液器及一次性吸頭
蒸餾水，
一次性試管
吸水紙

注意事項(xiàng)

從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差
建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。
嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中

標(biāo)本要求

1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育60分鐘。
棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

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酶標(biāo)儀

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[供應(yīng)]48T/96T-人NOD樣受體（NLR）ELISA 試劑盒