詳細(xì)介紹
【名稱】:人環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒
【規(guī)格】:48T/96T
【方法】:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
【性狀】: 液態(tài)
【Elisa試劑盒種屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
【標(biāo)本】血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等
【用途】:科研 實(shí)驗(yàn)
【貯存】: 貯存于2℃-8℃.如有需要,我們將竭城為顧客提供售前,售中,售后的*服務(wù)!
試劑的準(zhǔn)備之顯色
顯色是 ELISA 中的zui后一步溫育反應(yīng),此時(shí)酶催化無色的底物有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。在一定時(shí)間內(nèi),陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時(shí)間的延長而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測定中,加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行,時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制,有時(shí)可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時(shí)間,及時(shí)判斷。
OPD 底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30 分鐘后即不再加深,再延長反應(yīng)時(shí)間,可使本底值增高。OPD 底物液受光照會(huì)自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。OPD 產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB 受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺(tái)上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果。T MB 經(jīng)HRP 作用后,約40 分鐘顯色達(dá),隨即逐漸減弱,至2 小時(shí)后即可*消退至無色。TMB 的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時(shí)間(12-24 小時(shí))不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時(shí)可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
人環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
保存: 貯藏于2-8°C。
標(biāo)本收集
1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織液標(biāo)本。
2. 室溫(20-25℃)下保存標(biāo)本不要超過8小時(shí)。2-10℃保存標(biāo)本,不超過48小時(shí)。如耽擱的時(shí)間更長,請?jiān)?20℃或更低的溫度下保存標(biāo)本。標(biāo)本避免多次凍融,這樣可能會(huì)損失蛋白活性,產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
人環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒操作步驟
試劑盒應(yīng)平衡至室溫(20-25°C )再試驗(yàn)。 取出所需反應(yīng)板。
1. 加入10ul標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)、10ul標(biāo)本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。
2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒,封住板孔,室溫溫育 45分鐘。
3. 洗板:甩盡板內(nèi)液體,用洗滌液洗滌反應(yīng)板(每孔內(nèi)加入350ul洗滌液),并去除水滴(在厚疊吸水紙上拍干);反復(fù)洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液, 輕輕混勻10秒,室溫溫育20分鐘。
5. 每孔加入100ul終止液(Stop Solution)。輕輕混勻30秒;30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD值。
以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。
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