人ELISA試劑盒,人纖溶酶原激活劑ELISA試劑盒說(shuō)明書

Elisa試劑盒簡(jiǎn)單介紹：

【產(chǎn)品名稱】：人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒

【英文名稱】：Human plasminogen activator,PLGA ELISA KIT

【檢測(cè)種屬】：人、大鼠、小鼠等動(dòng)植物。

【產(chǎn)品用途】：被測(cè)樣品定性或定量分析

【產(chǎn)品規(guī)格】：48T、96T

【檢測(cè)方法】：酶免法/酶聯(lián)免疫法(ELISA)

【保存條件】：2-8℃

【供 貨 期】：1-3天(現(xiàn)貨供應(yīng))

【產(chǎn)品性狀】：液體盒裝

【服務(wù)優(yōu)勢(shì)】：全程提供ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)和ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè)

【樣本儲(chǔ)存】：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70℃可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒操作步驟

1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；每孔再加入酶標(biāo)工作液100μL；空白對(duì)照孔不加。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板）。

6、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。

7、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

8、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。

9、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒的基本原理有這幾條： 

  1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水 性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；  

  2.抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué) 和酶學(xué)活性； 

  3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反 應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。 

人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中封閉

  1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，蔗糖本身沒(méi)有封閉作用;

  2.封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

  3.加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護(hù)劑”的作用。

  4.蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過(guò)BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時(shí)進(jìn)行處理。

人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒的操作技術(shù)有哪些影響？

  1.合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。

  2.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

  3.嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

  4.加樣后及時(shí)放人孵箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

  5.封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。