大鼠載脂蛋白A1（apo-A1）ELISA試劑盒

【產(chǎn)品名稱】：大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒

【檢測方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)

【產(chǎn)品性狀】：96T/48T，盒裝液體

【貯    藏】：2-8°C

【有 效 期】：Elisa試劑盒二年，我公司Elisa試劑盒均為批次，可放心購買。

【主要成分】：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。

【標(biāo)    本】：血清/血漿/細(xì)胞培養(yǎng)上清液/組織勻漿/組織液/尿液/分泌物

【質(zhì)量承諾】：我們堅持對產(chǎn)品質(zhì)量作不斷的評估、創(chuàng)新和改善以確保您對我們產(chǎn)品的高度信任。

【待檢樣本】：體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等

【樣品采集】：Elisa試劑盒收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70℃可保存6個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

【保 質(zhì) 期】：半年(六個月)

一、實(shí)驗(yàn)原理：

大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒原理

ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

二、實(shí)驗(yàn)過程：

1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

三、大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)

1. 當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。

5. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

7. 底物請避光保存。

8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

四、ELISA試劑盒優(yōu)點(diǎn)：

我司共有14000余種ELISA試劑盒物種涵蓋Human,Mouse,Rat等，品種具備以下優(yōu)點(diǎn)：

*品質(zhì)—高品質(zhì)的抗體和試劑是ELISA試劑盒的基礎(chǔ)

精確特異—特異檢測目標(biāo)分子，結(jié)果精確可重復(fù)

高度靈敏—可檢測到pg/mL級別的目標(biāo)

種類齊全—可覆蓋人、大鼠、小鼠、棉鼠、獼猴、豬、馬、犬和貓等多個種屬

優(yōu)化設(shè)計—可拆卸式96孔板(12X8)，為血清、血漿、尿樣和細(xì)胞培養(yǎng)物樣本檢測進(jìn)行優(yōu)化

五、常見問題解答

小編簡單整理了5個問題，具體內(nèi)容如下：

1、一個大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒檢測幾個樣品？

小編自己在各大論壇看到zui多的三個答案：

1）48T 可做42個樣本加6個標(biāo)準(zhǔn)曲線；96T 可做90個樣本加6個標(biāo)準(zhǔn)曲線

2）以96T試劑盒來算，定量的試劑盒一般可以做90個左右的樣品，定性的試劑盒可以做94個左右的樣品

3）96T的ELISA試劑盒，去除標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)孔檢測，zui多還能檢測80個標(biāo)本；48T的zui多30個樣本。

2、大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒96T的能做檢測多少血清樣品？板能重復(fù)利用嗎？

96T，一般做復(fù)孔的話，做標(biāo)準(zhǔn)曲線需要16個孔，剩下80個孔就可以做40個樣本。這個板不能重復(fù)利用。而且配套的試劑也只是夠一塊板子用的。

3、想請教一下，我想用elisa法測血清里的一種抗原，查了資料，發(fā)現(xiàn)沒有現(xiàn)成的試劑盒用，現(xiàn)在就有2種備選方案，一種是買抗體對自己包被（查了滬鼎生物等大公司都沒有可用于elisa的單抗）。哪種比較好呢？自己包被的會不會比國產(chǎn)的試劑盒可靠呢？

如果你覺得技術(shù)不錯有隊(duì)其他公司不放心，可以自己購買抗體對自己包被，這個就是麻煩點(diǎn)，自己包被用著放心，舒心；

另外國內(nèi)還是有一些資質(zhì)不錯的公司，如上海滬鼎，上海滬鼎，上海滬鼎等等

4、western 和ELISA 處理樣本有何差別？

Western Blot 樣品制備要加蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制劑），然后冰上研磨，收集于EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm離心15min，取上清分裝，即得到蛋白樣品。建議直接電泳，多余的-80保存。建議分裝的蛋白每支略多于一次上樣量，一次性用完一支，避免反復(fù)凍融。

ELISA樣品，直接腦組織冰上勻漿，收集于EP管，同上一樣離心，大約220-250ul每支分裝（因?yàn)镋LISA上樣量基本都是每孔100ul，做復(fù)孔，每個樣品2孔，就需要200ul，為了避免不夠2孔，分裝時要大于200ul每支），直接實(shí)驗(yàn)。多余的-80保存，一樣避免反復(fù)凍融。

不過ELISA少量樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，或者查閱文獻(xiàn)，看看大概組織里有多高濃度，選擇合適的試劑盒，測量范圍要與組織濃度相符。避免濃度過高測量不準(zhǔn)，或者濃度過低，小于試劑盒zui低可測濃度。

5、Elisa試劑盒該買哪家公司的呢？

提出這個問題的朋友其實(shí)該打，目前上各個品牌的試劑盒生廠商，都會有其偏重點(diǎn)，像滬鼎生物在細(xì)胞因子方面的試劑盒就非常牛逼，而其他牌子也一樣的。

Bender：粘附分子方面的試劑盒；

Cayman：花生四烯酸類產(chǎn)品的試劑盒；

Merck(Linco)：內(nèi)分泌研究方面的試劑盒；

Tips：

1、買Elisa試劑盒時，盡量先查文獻(xiàn)，通過文獻(xiàn)找品牌，再找供應(yīng)商，找供應(yīng)商就找正規(guī)代理商，千萬不要去干“賠夫人又折兵”的蠢事。

2、ELISA中，復(fù)孔就是同一個樣品加到至少兩個孔中（一般3個或4個），zui后取其平均值作為樣品的讀數(shù)，這樣測得的結(jié)果才有說服力！

做復(fù)孔是為了較好的較少組內(nèi)差異，如果血清不足不做復(fù)孔也可以。