兔子ELISA試劑盒,兔血管性血友病因子（VWF）ELISA試劑盒

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試驗原理

ELISA檢測試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關系。

產(chǎn)品規(guī)格

規(guī)格     可測樣數(shù) 標準孔 空白對照     產(chǎn)地 庫存

96T      85個樣    10       1         進口 現(xiàn)貨

48T      37個樣    10       1         進口 現(xiàn)貨

自備材料

1）蒸餾水。

2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振蕩器及磁力攪拌器等。

試劑盒組成

兔血管性血友病因子(VWF)ELISA試劑盒安全性

1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

樣品收集、處理及保存方法

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量shengli鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。 每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。

3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物 素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3   次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。

9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

試劑盒選擇
◎衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標簽的產(chǎn)品，試劑應從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡便性，安全性及經(jīng)濟性作出全面的評價。
◎靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力；2)為試劑對人群或大量樣品中陽性檢出的能力(假陰性越少越好) ，取決于包被物的全面性。
◎特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力(無假陽性)，取決于包被抗原(體)及標記抗原(體)
的純度及特異性。
◎精密度：ELISA 試劑一般指其批內(nèi)CV，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍試劑盒選擇
◎穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲存的時間，一般采用破壞性試驗即將試劑存放于37℃保存，定期測定其靈敏度，特異性和精密度等指標，直到其質(zhì)量指標開始下降為止，通常認為 37℃每穩(wěn)定一天相當于4-10
℃保存一個半月。
◎簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性試驗中結(jié)果判斷簡單明了，)定量試驗結(jié)果計算也應簡單。
◎安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。
◎經(jīng)濟性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術進步降低成本而市場價格比較合理。
試劑盒評價
◎試劑評價需要有的血清考核盤( Panel)進行檢測，一般實驗室不易從生檢所或臨檢中心取得，每進一次試劑評價一次也很麻煩。可以通過間接的信息對試劑進行選擇。
◎根據(jù)該試劑生檢所批批檢定報告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；
◎通過詢問試劑包被物的組成，如原料來源(基因工程或合成多肽)，片段的組合(按比例混合或化學合成)，片段的長短等判斷試劑的優(yōu)劣；
◎參考室間質(zhì)評評價報告中對試劑的評價結(jié)果，這比較客觀公正，因為統(tǒng)計數(shù)字均來自各參評醫(yī)院，反映了試劑在某一地區(qū)的使用情況；
◎根據(jù)部門發(fā)布的試劑評價結(jié)果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣。
儀器質(zhì)控
為使儀器保持*工作狀態(tài)應建立維護和校正儀器的標準操作程序(SOP)，所要控制的儀器包括移液器(加樣槍)，水浴箱(溫箱)，洗板機和酶標儀。
◎移液器：ELISA 加樣量小(5-100ｕl)，其準確性直接影響實驗結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確，一般應在±10%以內(nèi)；
◎水浴箱 經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實測溫度是否*，允許有±1℃的誤差；
◎洗板機 每個廠家設置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul ，人工扣板時，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；
◎酶標儀 經(jīng)常維護其光學部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。
附1：酶標儀校正程序
◎濾光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標儀上卸下，用UV-2201 型紫外-可見分光光度計(波長精度±0.3nm)于可見光區(qū)對每個濾光片進行掃描，其檢測值與標定值之差為濾光片波長精度。
◎通噵差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑，透明，無污染以酶標板架作載體，將其(內(nèi)含200ul 甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A 左右)置于8 個通道的相應位置，蒸溜水調(diào)零，1 于490nm處連續(xù)測三次 ,觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的*性，可用極差值來表示?？组g差的測量是選擇同
一廠家，同一批號酶標2 板條(8 條共96 孔)分別加入 200ul 甲基橙溶液(吸光度調(diào)至0.100A 左右)先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm 處檢測，其誤差大小用±1.96s 衡量。n 零點飄移(穩(wěn)定性觀察)：取8 只小孔杯分別置于8 個通道的相應位置，均加入200ul 蒸溜水并調(diào)零，于490nm 處每隔30 分鐘測一次，觀察各個通道4 小時內(nèi)吸光度的變化。
附 1：酶標儀校正程序
◎精密度評價：每個通道3 只小杯分別加入200ul 高中低3 種不同．濃度的甲基橙溶解，蒸溜水調(diào)零，于490nm作雙份平行測定，每日測二次(上下午各一次)，連續(xù)測定 20 天。分別計算其批內(nèi)精密度，日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應的CV 值。
◎線性測定：用電子天平精確稱取甲基橙配制 5 個系列的溶液，于490nm 平行測8 次，取其均值。計算其回歸方程，相關系數(shù)及標準估計誤差 s，并用±1.96s 表示樣品測量的誤差范圍.雙波長測定評價：取一分甲基橙溶液，分別加入3 種不同濃度的溶血液(測定波長為 490nm，校正波長為585nm)，先后于8 個通道
檢測，每個通道測3 次，51 比較各組之間是否具有統(tǒng)計學差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果。
◎一般酶標儀無 585nm 濾光片，可選用550nm 或630nm 濾光片。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液(校正波長為630nm)

兔血管性血友病因子(VWF)ELISA試劑盒說明 
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。 
6. 中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期：6個月