ELISA試劑盒,兔子單核細(xì)胞趨化蛋白1ELISA試劑盒

 一、服務(wù)

      我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要，比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求，而量身定制檢測試劑盒，有效控制檢測試劑成本。并可提供免費(fèi)代測。

二、兔子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒檢測概述

      ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

      實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。

三、兔子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒技術(shù)流程

雙抗體夾心法(檢測未知抗原) 間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ guoye。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃guoye。次日洗滌3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

四、ELISA試劑盒的性能：
準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/ml。
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

五、ELISA試劑盒的優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)：
·特異性高：進(jìn)行了廣泛的非特異性排查，避免了由于交叉反應(yīng)和干擾導(dǎo)致的實(shí)驗數(shù)據(jù)誤差。 
·精 度 高：通過加標(biāo)回收率和線性稀釋實(shí)驗，確保樣本值的準(zhǔn)確性，精確度高于同類產(chǎn)品（較低的CV%）。 
·重復(fù)性好：lot-to-lot檢測確保zui小的批間差異。 
·可靠性強(qiáng)：經(jīng)優(yōu)化的試劑盒組分可有效的zuzhi假陽性和假陰性試驗結(jié)果。 
·標(biāo)準(zhǔn)曲線：在保證精準(zhǔn)數(shù)據(jù)的前提下提供較寬的檢測范圍，以滿足需求。 
·價格低廉：*RD試劑，國內(nèi)分裝配置，大大減少了客戶因為價格高而必須購買國產(chǎn)試劑盒的顧慮。

六、ELISA試劑盒實(shí)驗操作的常見問題：
1. 問--客戶用48T試劑盒，大概只有十個樣所以他一次用不完那么多板條，但是他想做兩次，可封板膜只有一張，那如果用完了怎么辦？可以用什么別的東西取代嗎？
答--可以把封板膜剪掉，用多少剪多少也可以用封口膜替代。
2. 問--實(shí)驗過程中溫育是放在哪溫育呢？
答--可以在水浴箱、細(xì)胞培養(yǎng)箱和烘干箱里面都行，只要恒定溫度為37度。

七、ELISA試劑盒的必知項：
1. 水溶性、低黏度、無腐蝕、不易燃、*。
2. 所采用的方法特異性好，靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度。
3. 所用標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)參考物符合推薦標(biāo)準(zhǔn)和要求。
4. 貯存期至少為1年。

八、兔子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
2.  自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過程中。
特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人C3，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。