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詳細(xì)介紹
一、“豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒”實驗原理：
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
二、ELISA常用的幾種方法：
1、雙抗體夾心法測定抗原
將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物;
加抗原免疫第二種動物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動物抗體的抗體);
加底物。底物的降解量＝抗原量。
2、直接法測定抗原
將抗原吸附在載體表面；
加酶標(biāo)抗體，形成抗原—抗體復(fù)合物；
加底物。底物的降解量＝抗原量。
3、間接法測定抗體
將抗原吸附于固相載體表面；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；
加酶標(biāo)抗體；
加底物。 測定底物的降解量＝抗體量。
三、“豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒”操作注意事項：
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。
4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
四、elisa試劑盒常見問題：
1.產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格？可檢測多少個樣本？
產(chǎn)品分為48T和96T兩種規(guī)格。 每次實驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個不同濃度，加上空白孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個孔。因此，一個48T試劑盒zui多可以測定40個樣本（不做重復(fù)且一次用完），一個96T試劑盒zui多可以測定88個樣本（不做重復(fù)且一次用完）。可以根據(jù)實際樣本數(shù)量和實驗計劃選擇合適的產(chǎn)品規(guī)格。
2.48T和96T的試劑盒有哪些不同？
48T和96T的試劑盒，每個孔的反應(yīng)體系都是*一樣的。不同的是試劑盒中各組分的規(guī)格，詳見說明書。
3.產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何？
產(chǎn)品在研發(fā)前期已通過嚴(yán)格的穩(wěn)定測試，發(fā)貨前亦須通過檢測并提供質(zhì)檢報告，在市場上深受廣大客戶的贊許！
五、洗板方法：
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
六、操作步驟：
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
4.隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
七、結(jié)果判斷：
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣
八、“豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒”試劑盒性能：
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0pg/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月
免責(zé)聲明：
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2.嚴(yán)格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。
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