酶聯(lián)免疫試劑盒,人白介素12（IL-12/P70）ELISA試劑盒

一、產(chǎn)品簡介

    運輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定，前提是將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下。

二、實驗過程中需要用到的器材

1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀；

2.高速離心機；

3.電熱恒溫培養(yǎng)箱；

4.干凈的試管和Eppendof管；

5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器；

6.蒸餾水，容量瓶等。

三、標(biāo)本的采集及保存
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。
注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月，-80℃不應(yīng)超過2個月；標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。

四、“酶聯(lián)免疫試劑盒,人白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒”操作方法

    各種類型ELISA測定時一般需經(jīng)過這些步驟：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。

1.按說明書的要求準(zhǔn)備實驗中需用的試劑。

2.ELISA試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。

3.從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。

4.試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。

五、ELISA結(jié)果處理

1.ELISA實驗中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計算每個濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。

2.平均OD值減去空白孔的OD值。

3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線。

六、結(jié)果判斷
常用下列幾種方法表示結(jié)果：
1.定性測定
2.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
3.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位

七、“酶聯(lián)免疫試劑盒,人白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒”注意事項

收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本，儲存在 4 ℃ 備用，如有特殊 原因需要周期收集標(biāo)本， 
將標(biāo)本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時， -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
液體類標(biāo)本： 
標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝ 100ul × 檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
血清： 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿： 
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液： 
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清： 
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的 成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 
釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本： 
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 
漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。