豬三葉因子3（TFF3）ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)

豬三葉因子3（TFF3）ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中豬三葉因子3（TFF3）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被豬三葉因子3（TFF3）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬三葉因子3（TFF3）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

豬三葉因子3（TFF3）ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)操作問題：

試劑準(zhǔn)備不當(dāng)可能影響酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA結(jié)果

在實驗室，對試劑準(zhǔn)備一般不太注意，通常的做法是，在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。

    因此，在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。

此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制。

樣品要求

　·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。

　·檢測的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿。

　·樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存，若長期保存應(yīng)-70℃。

　·樣本量的要求：若一個指標(biāo)做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

  ·客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與溝通確認(rèn)。

Elisa定量測定/定性測定比較

Elisa定量測定

ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

Elisa定性測定

定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

的回收率

    elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關(guān)系，說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機氯含量測定,樣品水中含有無機氯20mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,測定時忽略體積變化,如果測定出樣品中無機氯為2.98mg/L,則認(rèn)為回收率為98%。

對于定量檢測來說，主要還是一個準(zhǔn)確度的驗證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好，所以就貼上去了。相對回收率可能會高于100%的，如果只是說“損失程度”，其實是不準(zhǔn)確的。應(yīng)該說，回收率越接近100%，說明這個試劑盒的準(zhǔn)確度越高。