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3D多肽水凝膠超越基質(zhì)膠

2017-3-3  閱讀(4128)

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Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture

——3D多肽水凝膠超越基質(zhì)膠(matrigel)

Yeasen多肽水凝膠產(chǎn)品是由一種由16個氨基酸組成的多肽,在鹽離子存在情況下自發(fā)組裝成的水凝膠支架結(jié)構(gòu)。多肽的大小通常在5nm左右,是親水性和疏水性氨基酸殘基交替排列組成的兩性分子肽段,能形成折疊片結(jié)構(gòu),并自組裝形成納米纖維,這些納米纖維相互交織在一起形成基質(zhì)并進一步形成含水量超過99.5%的水凝膠支架(見圖1)。

Yeasen多肽水凝膠無需通過調(diào)節(jié)聚合物和交聯(lián)劑的量來獲得不同類型的水凝膠。組分單一,受環(huán)境影響小,針對不同類型細胞配有不同類型水凝膠產(chǎn)品,可直接進行挑選使用。

 

圖1:圖示為兩性多肽通過自組裝形成水凝膠的過程。

3D多肽水凝膠的特點:

還原體內(nèi)外壞境,給細胞更真實的感覺——Yeasen水凝膠系列產(chǎn)品在適當條件下,可自組裝成平均孔徑為50~200nm的纖維狀結(jié)構(gòu),形成與天然細胞外基質(zhì)(ECM)相似的網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu),能夠為細胞的粘附、遷移、增殖和分化提供更接近體內(nèi)的外環(huán)境。

組分明確,無動物異源蛋白和病原體——Yeasen水凝膠系列產(chǎn)品是一種人工合成的多肽類生物納米材料,由1%(w/v)的合成多肽及99%的水組成,無需通過腫瘤分離,能有效避免因動物異源蛋白和病原體污染造成的細胞生長抑制等其他不利影響。

操作簡單,觀察方便——可以直接用熒光染料和免疫試劑對培養(yǎng)在3D水凝膠中的細胞的進行標記,Yeasen水凝膠產(chǎn)品外觀呈透明狀,可用共聚焦顯微鏡或其它顯像技術(shù)獲得清晰的細胞形態(tài)圖像。Yeasen多肽水凝膠4度保存,可室溫操作。

3D細胞培養(yǎng)水凝膠功能:

(1)適合大多數(shù)種類細胞的培養(yǎng)。

(2)促進細胞的分化,例如,肝前體細胞、大鼠PC12細胞、心肌細胞、海馬神經(jīng)元細胞及內(nèi)皮細胞等;

(3)增強原代細胞貼壁能力,如神經(jīng)元細胞、成纖維細胞及角化細胞等;

(4)增強轉(zhuǎn)染細胞系的貼壁能力,如MG-63、SH-SY5Y、HEK-293及NIH3T3等。

3D細胞培養(yǎng)水凝膠(Hydrogel)與基質(zhì)膠(Matrigel)對比

 

3D細胞培養(yǎng)水凝膠(Hydrogel)

基質(zhì)膠(Matrigel)

生產(chǎn)方式

人工合成

EHS小鼠腫瘤中分離

主要成分

1%(w/v)的合成多肽+99%的水

主要成分由層粘連蛋白,Ⅳ型膠原,巢蛋白,硫酸肝素糖蛋白等,還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等

外觀

透明

淡黃色到深紅色(含酚紅)

批次差異性

穩(wěn)定

批次濃度差異性大

儲存

2-8℃

-20℃,使用時需要過一夜夜融化

運輸

冰袋

干冰

適用實驗類型

促進增殖和分化;促進原代細胞貼壁和增殖;支持轉(zhuǎn)染細胞的增長;干細胞增殖,腫瘤細胞遷移/侵襲

細胞生長、分化,形態(tài)研究,細胞化學功能,細胞遷移/侵襲,細胞基因/蛋白表達,裸鼠成瘤

使用濃度

0.1%-1%

根據(jù)實驗目的稀釋(1:3或原液)

操作注意事項

室溫;避免引入鹽離子,用無菌蔗糖或去離子水稀釋

嚴格低溫:實驗涉及的液體、耗材需提前預冷

【注】如用于血管生成實驗,請購買高濃度基質(zhì)膠(貨號:354248)

簡便的操作流程:

1)水凝膠原液水浴超聲(或渦旋振蕩)30 min,離心去除氣泡;

2)用20%無菌蔗糖稀釋超聲后的水凝膠至需要的濃度;

3)消化收集細胞,離心去除培養(yǎng)基;

4)用10%無菌蔗糖重懸細胞至需要的濃度;

5)取等體積(1:1)稀釋的水凝膠和細胞懸液迅速混勻;

6)迅速(2 min內(nèi))將上述水凝膠和細胞混合物轉(zhuǎn)移至細胞培養(yǎng)板等;

7)緩慢加入細胞培養(yǎng)基,30 min內(nèi)更換2次培養(yǎng)基;

8)30~60 min即可成膠。

實例展示:

1)用于成人骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)(Cat No. 40134ES)

 

圖1 成人骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)在水凝膠中成脂誘導培養(yǎng)后的細胞形態(tài)圖

左圖為接種在3D細胞水凝膠中的成人骨髓間充質(zhì)干細胞在成脂誘導10天后的形態(tài)。右圖為采用油紅O試劑對左圖細胞進行染色的結(jié)果,紅色染色代表是脂肪滴。

圖示表明間充質(zhì)干細胞在水凝膠中可以被成功誘導為脂肪細胞,形成大量的脂肪滴。水凝膠材料不會影響干細胞的分化活性,同時保持了干細胞自我更新或分化成特定細胞系的能力,具有成為新一代組織或器官修復再生材料的潛力。

2)用于腫瘤細胞培養(yǎng)(Cat No. 40137ES)

圖2 腫瘤細胞在水凝膠中的顯微觀察圖

表達GFP基因的293細胞(左圖)與乳腺腫瘤細胞(右圖)在3D細胞培養(yǎng)水凝膠中培養(yǎng)一周后的顯微觀察結(jié)果。這兩種腫瘤細胞均已形成球樣細胞團塊。表明細胞培養(yǎng)的水凝膠可促進腫瘤細胞形成三維結(jié)構(gòu)的多細胞球體。

3)用于胎兒骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)(Cat No. 40138ES)

圖3 胎兒骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)在水凝膠中培養(yǎng)5天后的細胞形態(tài)

采用鈣黃綠素(Calcein, AM)和碘化丙啶(PI)對細胞進行雙熒光染色,其中綠色熒光指示活細胞,紅色熒光指示死細胞。指示活細胞的綠色熒光細胞團在水凝膠中均勻分布,指示死細胞的紅色熒光基本觀察不到,表明細胞培養(yǎng)水凝膠對胎兒骨髓間充質(zhì)干細胞的細胞毒性很低,擁有良好的細胞相容性。

相關(guān)產(chǎn)品:

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

價格(元)

Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, Normal

(替代Matrigel 基底膜/基質(zhì)膠)

40134ES08

5 ml

1356.00

Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, for Adhesion and Migration

(替代Matrigel 基底膜/基質(zhì)膠,促粘附與遷移型)

40135ES08

5 ml

1676.00

Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, Neural Stem Cell Specially 3D(替代Matrigel 基底膜/基質(zhì)膠,適用于神經(jīng)干細胞)

40136ES08

5 ml

1676.00

Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, Tumor Cell Specially

(替代Matrigel 基底膜/基質(zhì)膠,適用于腫瘤細胞)

40137ES08

5 ml

1676.00

Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, Chondrocyte Specially

(替代Matrigel 基底膜/基質(zhì)膠,適用于軟骨細胞)

40138ES08

5 ml

1676.00

Human Fibronectin 人纖維連接蛋白

40105ES08        

5 mg

3200.00

Mouse Fibronectin 小鼠纖連蛋白

40106ES03        

1mg

6000.00

Rat Fibronectin 大鼠纖連蛋白

40124ES02        

0.5mg

2888.00

Insulin (From Bovine) 牛胰島素

40107ES25        

25mg         

247.00

Matrixgel 基底膜/基質(zhì)膠

40111ES08                 

5ml

1199.00

Matrixgel, Reduced Growth Factor  基底膜/基質(zhì)膠(低生長因子)

40123ES08        

5ml

1469.00

 

 

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