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dsDNA HS Assay Kit for Qubit®數(shù)據(jù)測(cè)評(píng)

2018-5-23　　閱讀(1714)

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行走江湖 靠的就是實(shí)力dsDNA HS Assay Kit for Qubit®數(shù)據(jù)測(cè)評(píng)

——簡便、靈敏、準(zhǔn)確、穩(wěn)定

dsDNA Assay Kit for Qubit®是Yeasen生物開發(fā)的專門用于Qubit®熒光儀或熒光酶標(biāo)儀的試劑盒，線性范圍0.2-100 ng，即使在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，也可以選擇性的檢測(cè)dsDNA，且耐受較高濃度的蛋白質(zhì)、鹽類、洗滌劑等污染物。

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

儲(chǔ)存

dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

12640ES60

100T

2-8℃

dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

12640ES76

500T

2-8℃

產(chǎn)品使用方法

 

 

1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1）在使用前，將試劑盒中的各組分恢復(fù)至室溫。

2）準(zhǔn)備足夠量0.5 mL PCR薄壁管并標(biāo)注。請(qǐng)勿在PCR管側(cè)壁標(biāo)注，以免影響熒光信號(hào)采集。推薦使用Qubit® assay tubes（Cat. No. Q32856）或Axygen® PCR-05-C tubes（part no. 10011-830）。

2. 配制檢測(cè)工作液

在塑料容器中，使用dsDNA Buffer按比例將適量dsDNA Reagent稀釋至1×（如：取1 μL dsDNA Reagent，加入199 μL dsDNA Buffer），現(xiàn)用現(xiàn)配。工作液配制好后，3小時(shí)內(nèi)使用。

3. 配制待檢樣品

1）配制待檢標(biāo)準(zhǔn)品。取190 μL檢測(cè)工作液至標(biāo)準(zhǔn)品PCR管中，分別加入10 μL dsDNA Standard 1和dsDNA Standard 2至相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品PCR管中，輕輕渦旋振蕩2-3 sec，盡量避免氣泡產(chǎn)生。

2）配制待檢樣品。取180-199 μL檢測(cè)工作液至樣本PCR管中，分別加入1-20 μL待檢樣本，使PCR管中每個(gè)樣本終體積為200 μL，輕輕渦旋振蕩2-3 sec，盡量避免氣泡產(chǎn)生。

4. 檢測(cè)

1）將所有待檢PCR管置于室溫避光孵育2 min。

2）按照Qubit®熒光儀的操作說明，選擇dsDNA High Sensitivity檢測(cè)程序測(cè)定熒光信號(hào)值。

產(chǎn)品評(píng)測(cè)

1. 高選擇性

本試劑盒對(duì)dsDNA具有高度選擇性，不定量RNA和ssDNA。

 

圖  dsDNA Assay Kit for Qubit®試劑盒對(duì)DNA的選擇性。樣品使用λDNA，E. coli rRNA以及DNA+RNA 1:1混合物，每個(gè)測(cè)試3個(gè)平行，CV≤2%。

2. 靈敏度高，準(zhǔn)確度高

本試劑盒可準(zhǔn)確定量dsDNA濃度在0.2-100ng的樣本，且不論在低濃度區(qū)間（0-1ng）或高濃度區(qū)間都能準(zhǔn)確定量。使用2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品確定線性標(biāo)準(zhǔn)曲線后，定量真實(shí)樣本，所有測(cè)定值均在線性曲線上，與T*品牌高靈敏型產(chǎn)品無明顯差異，結(jié)果精密度CV≤5%，準(zhǔn)確度在±10%以內(nèi)。

 

 

圖  dsDNA Assay Kit for Qubit®測(cè)試準(zhǔn)確性。樣品使用標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)測(cè)試3個(gè)平行，CV≤5%。

3. 抗污染能力強(qiáng)

將本試劑盒應(yīng)用于存在高濃度污染物的樣本中定量dsDNA，結(jié)果表現(xiàn)優(yōu)異，度CV≤5%，精密度±10%以內(nèi)。除以下污染物外，本試劑盒還可耐受2%瓊脂糖，200 mM醋酸銨，200 mM醋酸鈉，2%苯酚，4%氯方等污染物（10μL樣本）。

 

 

表  污染物測(cè)試表

污染物

添加量(10 μL樣品)

測(cè)試平均值

度（CV%）

精密度

對(duì)照(未加抑制物)

/

9.213

0.54%

/

NaCl

200 mM

9.080

1.65%

-0.8%

MgCl2

40 mM

8.653

1.21%

-5.5%

TritionX-100

0.02%

8.947

1.28%

-2.3%

BSA

400 μg/mL

9.120

1.43%

-0.4%

乙醇

20%

9.373

0.53%

2.3%

PEG

20%

9.733

1.36%

6.25%

dNTPs

2 μM

9.133

2.18%

-0.29%

4. 產(chǎn)品穩(wěn)定

本試劑盒包含高度濃縮的分析試劑、稀釋緩沖液和預(yù)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，在常溫條件下配合使用Qubit®進(jìn)行dsDNA濃度測(cè)試。其中，將標(biāo)準(zhǔn)品于37℃放置20天以上，仍可獲得優(yōu)異的測(cè)試結(jié)果，精密度CV≤5%，準(zhǔn)確度均在10%以內(nèi)。

 

圖  dsDNA Assay Kit for Qubit®標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性測(cè)試。樣品使用Yeasen標(biāo)準(zhǔn)品與T*品牌標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)測(cè)試3個(gè)平行，CV≤5%。

客戶測(cè)評(píng)

1. R*基因公司

標(biāo)品

T*品牌

翊圣

品牌A

品牌B

品牌C

4ng/μL

4.08

4.14

3.76

3.92

4.26

4.19

5.08

5.06

3.56

3.56

4.1

3.74

3.9

4.96

3.78

4.24

4.26

4.4

5.14

3.34

2ng/μL

1.78

1.65

1.47

1.6

1.65

1.45

1.87

1.94

1.39

1.37

1.71

1.65

1.37

2.04

1.37

1.45

1.68

1.33

1.92

1.34

1ng/μL

0.884

0.87

0.846

0.85

0.684

0.69

1.09

1.05

0.666

0.64

0.886

0.828

0.726

1.06

0.664

0.862

0.866

0.674

1.01

0.598

0.5ng/μL

0.404

0.39

0.388

0.39

0.326

0.35

0.462

0.42

0.29

0.28

0.4

0.41

0.304

0.4

0.272

0.368

0.374

0.408

0.41

0.28

2. Y*生物公司

樣本

1

2

3

4

5

翊圣（ng/μL）

3.98

4

5.1

5.05

5.52

5.41

6.46

6.39

5.32

5.25

4.02

5

5.3

6.32

5.18

T*品牌（ng/μL）

3.74

3.83

5

4.98

5.38

5.155

6.16

6.19

5.1

5.16

3.92

4.96

4.96

6.22

5.22

樣本

6

7

8

9

 

翊圣（ng/μL）

5.32

5.43

3.78

3.84

7.24

7.31

5.96

5.94

 

 

5.54

3.9

7.38

5.92

 

T*品牌（ng/μL）

5

5.23

3.66

3.63

6.78

6.81

5.14

5.36

 

 

5.48

3.6

6.84

5.58

 

 

 

3.R*公司

樣品

P*品牌 (ng/ul)

Yeasen (ng/ul)

1

31.8

26

2

58.6

60.8

3

32.8

29.2

4

78.6

80.2

5

10.1(P*品牌 標(biāo)準(zhǔn)品 10ng/ul)

10.4 (P*品牌 標(biāo)準(zhǔn)品 10ng/ul)

6

10(Yeasen 標(biāo)準(zhǔn)品2)

9.66 (Yeasen 標(biāo)準(zhǔn)品2)

 

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產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

價(jià)格（元）

dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

12640ES60

100 T

686.00

dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

12640ES76

500 T

2696.00

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文庫構(gòu)建試劑盒

類別

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格

快速流程

Hieff NGSTM MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®

12200ES24/96

24/96 T

6486/23567

轉(zhuǎn)座酶法流程

Hieff NGSTM Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina®

12206ES24/96

24/96 T

6155/23855

常規(guī)/鏈特異建庫通用

Hieff NGSTM MaxUp Dual-Mode mRNA Library Prep Kit for Illumina®

12301ES24/96

24/96 T

9756/32856

文庫構(gòu)建磁珠

分選100-400 bp DNA

Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads（100~200bp）

12599ES08/56

5/60 mL

1666/9106

回收50 bp以上DNA

Hieff NGSTM Smarter DNA Clean beads (50bp以上）

12600ES08/56/75

5/60/450 mL

1386/7586/29886

等同AMPure XP

Hieff NGSTM DNA Selection Beads（Superior AMPure XP alternative）

12601ES08/56/75

5/60/450 mL

986/6286/26186

總RNA純化

Hieff NGSTM RNA Cleaner

12602ES08/56/75

5/60/450 mL

1066/4266/38566

mRNA分離

Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit

12603ES24/96

24/96 T

616/2266

文庫構(gòu)建接頭

12種Index

Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1

12615ES04/16

12×4/12×16 T

1256/4536

12種Index

Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2

12616ES04/16

12×4/12×16 T

1256/4536

12種Index

Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3 

12617ES04/16

12×4/12×16 T

1256/4536

12種Index

Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4 

12618ES04/16

12×4/12×16 T

1256/4536

96種Index

Hieff NGSTM Tagment Index Kit for Illumina® (96 Index）

12610ES96

96 T

1365

文庫定量

qPCR Mix

Hieff NGSTM Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix

12302ES05

500 T

1526

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Hieff NGSTM Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard (1-6)

12307ES09

6×96 μL

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dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

12640ES05/09

100/500 T

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片段化

Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent

12609ES50

50 T

1466

末端修復(fù)/加A

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12608ES24/96

24/96 T

2066/6166

快速連接

Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module

12607ES24/96

24/96 T

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