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兼容常規(guī)與鏈特異性mRNA文庫構(gòu)建

2019-10-30  閱讀(1245)

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Hieff NGS® MaxUp II Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina

——兼容常規(guī)與鏈特異性mRNA文庫構(gòu)建

背景簡介

RNA被認為是生物信息傳遞的“橋梁”。而轉(zhuǎn)錄組測序可利用NGS技術(shù)對組織或者細胞中的RNA反轉(zhuǎn)錄之后的cDNA文庫測序,通過分析可計算不同RNA的表達量、發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本、進行轉(zhuǎn)錄本定位、分析可變剪切、檢測基因融合等,提供全面的轉(zhuǎn)錄組信息。

 

圖 遺傳學(xué)中心法則

目前主流的mRNA建庫主要流程是mRNA純化,mRNA逆轉(zhuǎn)錄,雙鏈cDNA合成,末端修復(fù),A尾添加,接頭連接,純化/分選,文庫擴增,時間上需要1.5 d甚至更久。

翊圣生物結(jié)合自身多年的分子酶創(chuàng)新研發(fā)經(jīng)驗,推出升級版快速mRNA建庫試劑盒,可在短的時間進行建庫。助力獲得優(yōu)異的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)。

 

亮點一覽

1、建庫快速:完整建庫比主流方法縮減1.5-2 h,1 d內(nèi)獲得高質(zhì)量文庫。

 

圖 升級版建庫試劑盒建庫流程

2、兼容常規(guī)與鏈特異性文庫構(gòu)建

本產(chǎn)品搭配兩種二鏈合成buffer,即含dNTP(常規(guī)建庫)與dUTP(鏈特異性建庫),可兼容兩種模式的mRNA文庫構(gòu)建。一個盒子兩種用處,不用再額外備貨。

3、逆轉(zhuǎn)錄酶,更適合復(fù)雜模板

RNaseH能特異的降解RNA-DNA雜交分子中RNA的特性,將RNA降解成小片段,影響反轉(zhuǎn)錄效率。YEASEN提供的第四代Hifair逆轉(zhuǎn)錄酶,去除RNase H活性,同時溫度的耐受性高達65℃,有利于復(fù)雜RNA模板二級結(jié)構(gòu)的打開,更利于逆轉(zhuǎn)錄的進行。

 

 

硬核支撐

以1 μg的標準品RNA(Agilent#740000)為起始,分別構(gòu)建鏈特異性文庫和非鏈特異性文庫,質(zhì)控后的文庫用illumina Hiseq X-10 PE150測序。

a. 優(yōu)異的測序質(zhì)量

 

b. 表達重復(fù)性高

 

c. 優(yōu)異的文庫均一性

 

d. rRNA殘留更低,有用數(shù)據(jù)更多

 

 

e. 鏈特異性建庫:98.5%的Reads比對到正義鏈上

 

 

客戶案例

單位:廣州某生物公司J*

樣本:草莓,油菜,核盤菌

結(jié)論:高質(zhì)量文庫,優(yōu)異的測序數(shù)據(jù)

a. 文庫報告

 

b. 測序質(zhì)量

 

c. 數(shù)據(jù)比對

 

d. 數(shù)據(jù)分布

 

e. 基因覆蓋度分析

 

單位:上海某生物公司O*

樣本:人,大鼠,西瓜

結(jié)論:高質(zhì)量文庫,優(yōu)異的測序數(shù)據(jù)

a. 建庫報告

 

b. 測序質(zhì)量

 

c. 數(shù)據(jù)比對

 

d. 數(shù)據(jù)分布

 

e. 基因覆蓋度分析

 

 

相關(guān)產(chǎn)品:

 

類型

名稱

貨號

規(guī)格

建庫試劑盒

Hieff NGS® MaxUpⅡ Dual mode mRNA Library Prep Kit for Illumina®

12300ES24/96

24/96 T

mRNA富集磁珠

Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit

12603ES24/96

24/96 T

rRNA去除試劑盒

Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)

12253ES24/96

24/96 T

RNA純化磁珠

Hieff NGS® RNA Cleaner

12602ES56/75

60/450 mL

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