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極速曝光~這個(gè)夏天,讓ECL點(diǎn)亮您的印跡膜

2020-3-26  閱讀(745)

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如果你常做WB實(shí)驗(yàn),結(jié)果不穩(wěn)定,沒(méi)有筆直的條帶,背景高,你的救星來(lái)了!這個(gè)美譽(yù)度非常高的ECL發(fā)光液,我?了3年,強(qiáng)?推薦!別看它只是一瓶小小的試劑,能量卻特別大,輕輕一滴,靜等3分鐘,在印跡膜上你會(huì)看到一條筆直的白光緩緩發(fā)出,太漂亮了,一天做實(shí)驗(yàn)的疲憊感瞬間就消失了。目前市場(chǎng)上的 ECL顯色液質(zhì)量參差不齊,如何去挑選適合自己實(shí)驗(yàn)的ECL就顯得特別重要,以下幾點(diǎn)建議大家反復(fù)閱讀并收藏。


01

靈敏度

反映的是ECL顯色液檢出被檢物質(zhì)低量的能力,用戶可根據(jù)樣本中待檢指標(biāo)的量選擇合適的檢測(cè)試劑,在做實(shí)驗(yàn)前需要對(duì)靶蛋白進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研。不能盲目選擇靈敏度過(guò)高的產(chǎn)品,例如,針對(duì)GAPDH,選擇了靈敏度過(guò)高的ECL發(fā)光液,帶來(lái)的結(jié)果很可能就是顯影得到棕色條帶。


▲ 圖:高靈敏度ECL對(duì)GADPH顯影的影響

02

信號(hào)持久度

指的是加入ECL顯色液后,穩(wěn)定發(fā)光的持續(xù)時(shí)間。穩(wěn)定持久的發(fā)光可實(shí)現(xiàn)多次曝光以獲得最佳的圖像。由于每張膠片只能使用一次,在判斷曝光時(shí)長(zhǎng)是否合適前必須進(jìn)行顯影。為了掌握信號(hào)和背景之間的平衡,一般都需要按照不同的時(shí)長(zhǎng)曝光多次。如果膠片過(guò)曝了,信號(hào)可能會(huì)被背景掩蓋。


▲ 圖:曝光不同時(shí)間對(duì)顯影的影響


03

抗體稀釋度

一抗和二抗的稀釋度在說(shuō)明書(shū)中一般都會(huì)有建議。稀釋度高的話,相對(duì)來(lái)說(shuō),可以減少一抗和二抗的消耗,節(jié)約更多的抗體,且可以降低雜蛋白的影響。


▲ 圖:二抗不同稀釋倍數(shù)對(duì)顯影的影響


04

信噪比

指的是正常目的信號(hào)與背景信號(hào)的比值,信噪比越高,ECL顯色的背景越低,目的條帶越清晰。

▲ 圖:高信噪比與低信噪比ECL對(duì)比


05

兼容性

比如對(duì)轉(zhuǎn)印膜、封閉試劑和各種抗體稀釋液等的兼容性。例如轉(zhuǎn)印膜有NC膜和PVDF膜,有些靈敏度不是特別高的ECL,會(huì)建議選擇NC膜。


06

文獻(xiàn)引用

產(chǎn)品的文獻(xiàn)引用數(shù)量和高質(zhì)量的 SCI 文章的引用是很多用戶都關(guān)心的問(wèn)題,這是業(yè)界對(duì)產(chǎn)品認(rèn)可的一個(gè)非常重要指標(biāo),至少其他的科研工作者已經(jīng)驗(yàn)證過(guò)了該產(chǎn)品的質(zhì)量,出問(wèn)題的概率會(huì)極低,而且對(duì)相關(guān)用戶的科研有一定的借鑒作用。小翌家的ECL發(fā)光液收集的SCI文獻(xiàn)已經(jīng)有60篇,且都是高質(zhì)量期刊。


▲ 圖:翌圣ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒文獻(xiàn)引用


07

蛋白表達(dá)豐度

很多新手會(huì)忽視的關(guān)鍵點(diǎn),對(duì)目的蛋白一知半解,實(shí)驗(yàn)很容易“翻車"。做實(shí)驗(yàn)前首先要了解目的蛋白的細(xì)胞定位、表達(dá)特異性、分子量、異構(gòu)體、抗體等?靶蛋白的表達(dá)量是否在ECL發(fā)光液的檢測(cè)范圍內(nèi)?

很多蛋白的表達(dá)是有組織特異性的,例如,最近的熱門(mén)靶蛋白CLDN 18.2,CLDN 18.2蛋白的表達(dá)具有組織特異性,主要在胃和胃腺癌組織中表達(dá)。在正常生理狀態(tài)下,CLDN 18.2僅在胃粘膜上已分化的上皮細(xì)胞中表達(dá),而在其它的健康組織中均無(wú)表達(dá)。還有一些蛋白,例如IL6和TFNA等炎癥因子,如果樣本未做刺激處理,目的蛋白表達(dá)含量很低,WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的條帶可能會(huì)很淺,這種情況下就需要選擇高靈敏度的ECL發(fā)光液來(lái)放大信號(hào)。


08

樣本量

Western Blot實(shí)驗(yàn)時(shí),由于樣品蛋白難以提取,樣品量有限,靶標(biāo)的量在這種情況下可能很低,成像時(shí)通常會(huì)出現(xiàn)條帶微弱或檢測(cè)不到目標(biāo)條帶。這會(huì)使研究人員需要重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),這既浪費(fèi)時(shí)間又浪費(fèi)資源。除了在樣本提取,抗體濃度,封閉液等方面需要優(yōu)化外,發(fā)光液ECL也需要選擇靈敏度,檢測(cè)范圍更廣的發(fā)光液,可以讓研究者選擇更少的樣本體積,產(chǎn)生相同的強(qiáng)信號(hào)的結(jié)果。



09

簡(jiǎn)便性

底物在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,實(shí)驗(yàn)時(shí)間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。這也不妨作為選擇ECL發(fā)光液的一個(gè)指標(biāo)。


▲ 圖:YeasenECL化學(xué)發(fā)光試劑盒操作步驟


10

經(jīng)濟(jì)性

國(guó)產(chǎn)試劑因?yàn)槭∪ゲ簧?/span>物流和報(bào)關(guān)費(fèi)用,與國(guó)外進(jìn)口試劑相比價(jià)格上有比較大的優(yōu)惠。有很多客戶因?yàn)閷?duì)品牌的信任度問(wèn)題,還是選擇國(guó)外進(jìn)口試劑。但是國(guó)產(chǎn)品中找一個(gè)美譽(yù)度高的品牌,也是一個(gè)非常好的選擇。通過(guò)行業(yè)調(diào)查公司以及網(wǎng)絡(luò),相關(guān)宣傳資料等可以找到美譽(yù)度高的 ECL化學(xué)發(fā)光液供應(yīng)商,這個(gè)反映的不僅是產(chǎn)品質(zhì)量的問(wèn)題,對(duì)供應(yīng)商的售前售后服務(wù)也是一個(gè)非常嚴(yán)格的檢驗(yàn)。


▲ 圖:Yeasen ECL超敏型底物Super相對(duì)品牌T同級(jí)別底物,檢測(cè)靈敏度更高


2種型號(hào)特別推薦,普適性非常強(qiáng)的Super ECL,它是發(fā)光液中的三好學(xué)生,靈敏、穩(wěn)定、性價(jià)比高。MaxiSignal型ECL,它像靈敏的過(guò)敏原,一點(diǎn)即發(fā),可以觸動(dòng)低飛克級(jí)的蛋白,光源長(zhǎng)達(dá)8個(gè)小時(shí),一下就消除了你的焦慮。
一般的實(shí)驗(yàn)室或者剛開(kāi)始做預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí),其實(shí)會(huì)配備2個(gè)不同靈敏度的發(fā)光液。以下這2個(gè)ECL基本上可以滿足實(shí)驗(yàn)者的所有需求了。




選購(gòu)指南


Yeasen

Enhanced ECL

增強(qiáng)型

Super ECL

超敏型

SuperDura

持久型

MaxiSignal

最高靈敏度型

適用樣本

靶點(diǎn)豐度較高,常規(guī)蛋白樣本

靶點(diǎn)豐度低,

樣本有限

靶點(diǎn)豐度較低,

樣本有限

靶點(diǎn)豐度極低,

樣品珍貴

檢測(cè)靈敏度

中等皮克級(jí)

低皮克級(jí)

中等飛克級(jí)

低飛克級(jí)

信號(hào)持續(xù)時(shí)間

< 2 h

< 12 h

< 24 h

< 8 h

適用檢測(cè)系統(tǒng)

所有試劑均適用X射線膠片,CCD成像儀

一抗稀釋濃度

1:1000-1:4000

1:1000-1:10000

1:1000-1:50000

1:5000-1:100000

二抗稀釋濃度

1:1000-1:4000

1:2000-1:10000

1:50,000-1:250,000

1:100,000-1:500,000

推薦用膜

NC

NC膜或PVDF

NC膜或PVDF

NC膜或PVDF

存儲(chǔ)穩(wěn)定性

室溫1

室溫1

室溫1

4℃ 1年,室溫半年

優(yōu)勢(shì)

同一級(jí)別靈敏度中信號(hào)*

適用于多數(shù)WB實(shí)驗(yàn)

最長(zhǎng)信號(hào)持續(xù)時(shí)間,極其適用于多次曝光

靈敏度,極其適用于痕量蛋白檢測(cè)


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