qPCR實(shí)驗(yàn)易做，但數(shù)據(jù)分析并非想象中的那么容易！數(shù)據(jù)分析的好與壞，極大程度上依賴于qPCR原始結(jié)果的質(zhì)量。

qPCR結(jié)果的評(píng)價(jià)指標(biāo)

•溶解曲線，是qPCR結(jié)果判定的第—要素。它的作用是判定目的基因是否得到擴(kuò)增。理論上，當(dāng)反應(yīng)體系中僅是目標(biāo)基因的擴(kuò)增，才是有效擴(kuò)增。
•標(biāo)準(zhǔn)曲線，是qPCR結(jié)果判定的金標(biāo)準(zhǔn)。（在溶解曲線判定為特異性擴(kuò)增后）它的作用是測(cè)定引物的擴(kuò)增效率及試劑的檢測(cè)上下限。根據(jù)文章發(fā)表對(duì)于qPCR數(shù)據(jù)的要求，擴(kuò)增效率應(yīng)在90-110%。
•擴(kuò)增曲線，是直接生成qPCR定量的數(shù)據(jù)，即Ct值。從試劑對(duì)比角度而言，Ct值大小常被用于判定試劑擴(kuò)增效率的高低。

產(chǎn)品描述

Hieff Unicon® Power qPCR SYBR Green Master Mix，這是一款旨在解決諸多qPCR實(shí)驗(yàn)常見疑難問題的qPCR試劑：
•它減少了大量引物驗(yàn)證的預(yù)實(shí)驗(yàn)工作，是一款具備強(qiáng)引物兼容性的Mix，
•它明確了qPCR溶解曲線峰型的標(biāo)準(zhǔn)——“單峰的形狀”，對(duì)于“什么溶解曲線是好的溶解曲線”的解讀具有參考意義，
•它讓時(shí)間不再碎片化，1次體系配制，24 h時(shí)間自由支配

產(chǎn)品特點(diǎn)

□引物兼容性強(qiáng)：針對(duì)遵循qPCR引物設(shè)計(jì)原則設(shè)計(jì)的引物，使用Hieff Unicon® Power 引物使用率可達(dá)97%；
□模板加入量靈活：可檢測(cè)10-107個(gè)拷貝個(gè)數(shù)的基因片段；
□特異性高：標(biāo)準(zhǔn)溶解曲線峰型，有效避免“胖”峰、“多”峰的出現(xiàn)；
□穩(wěn)定性強(qiáng)：產(chǎn)品經(jīng)50次反復(fù)凍融驗(yàn)證，擴(kuò)增性能無變化；
□操作靈活：配制好的qPCR反應(yīng)液4℃保存24 h，擴(kuò)增性能無變化；
□擴(kuò)增時(shí)間短：每個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中，退火、延伸一步完成，用時(shí)15 sec。

產(chǎn)品性能展示

1. 超高特異性，簡化了qPCR實(shí)驗(yàn)的引物設(shè)計(jì)


圖1. Hieff® Unicon Power預(yù)混液實(shí)現(xiàn)了引物的高特異性擴(kuò)增  以293T細(xì)胞cDNA為模板，利用Prime5軟件設(shè)計(jì)200bp擴(kuò)增長度的片段（GC含量：30%-70%）的引物共1000對(duì)，隨機(jī)挑選88對(duì)，使用Hieff Unicon® Power預(yù)混液測(cè)定引物的擴(kuò)增特異性。通過溶解曲線分析，88個(gè)檢測(cè)片段中有86個(gè)（97.7%）目標(biāo)片段有效擴(kuò)增，說明Hieff Unicon® Power預(yù)混液引物兼容性強(qiáng)，具備高特異性擴(kuò)增、高檢出率的特點(diǎn)。

2. 超高特異性，保證了Ct值的真實(shí)性

圖2. Hieff® Unicon Power預(yù)混液擴(kuò)增高度特異，Ct值結(jié)果可信度高  以1 ng人gDNA為模板，使用不同品牌預(yù)混液按照標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增程序，擴(kuò)增5個(gè)目的基因片段，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物情況。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液針對(duì)不同靶標(biāo)基因均可以高特異性擴(kuò)增，得到可信的靶標(biāo)片段Ct值。

3. 檢測(cè)范圍寬廣，模板添加不再糾結(jié)
    
圖3. Hieff® Unicon Power預(yù)混液可有效檢測(cè)6個(gè)數(shù)量級(jí)范圍的模板量  以質(zhì)粒DNA為模板，10倍梯度稀釋（107-101 拷貝/μl），擴(kuò)增IL23R基因。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液擴(kuò)增特異，線性相關(guān)性高，可在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。

4. 良好的穩(wěn)定性，讓體系配制更加靈活：
 

圖4. Hieff® Unicon Power預(yù)混液及其配制體系穩(wěn)定性俱佳  以1 ng 人gDNA為模板，使用Hieff Unicon® Power預(yù)混液在不同凍融次數(shù)或體系配制后4℃放置不同時(shí)間條件下，檢測(cè)TFRC基因擴(kuò)增情況。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液經(jīng)50次反復(fù)凍融或體系配制后4℃保存24h，擴(kuò)增性能無變化（溶解曲線圖數(shù)據(jù)未做展示）。

5. 兼容快速程序與標(biāo)準(zhǔn)程序：
 

標(biāo)準(zhǔn)程序                                                快速程序

95℃         5 min                                       95℃         30 sec   
95℃         10 sec                                     95℃         10 sec
60℃         30 sec     40 Cycles                  60℃         15 sec    40 Cycles

圖6. Hieff® Unicon Power預(yù)混液讓擴(kuò)增時(shí)間大大縮短 以1 ng人gDNA為模板，擴(kuò)增不同GC基因片段（30-70%），比較Hieff Unicon® Power預(yù)混液在標(biāo)準(zhǔn)程序和快速程序下的擴(kuò)增效果。結(jié)果顯示Hieff Unicon® Power預(yù)混液可兼容快速擴(kuò)增程序和標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增程序，使用快速程序可縮短擴(kuò)增時(shí)間。

常見問題

Q：如何選擇產(chǎn)品？
A：

Q：Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix產(chǎn)品可應(yīng)用于哪些實(shí)驗(yàn)？
A：可用于對(duì)特異性要求比較高或較難實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增的基因片段。這款產(chǎn)品極大程度上避免了引物二聚體、非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)，特別適合于引物中有單個(gè)堿基不同的擴(kuò)增。

Q：建議的模板加入量？
A：20 μL反應(yīng)體系，未經(jīng)稀釋的cDNA加入量建議不超過2 μL。

Q：試劑如何儲(chǔ)存及保質(zhì)期？
A：建議-20℃保存，有效期1年。

訂購信息

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