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qPCR實驗易做，但數據分析并非想象中的那么容易！數據分析的好與壞，極大程度上依賴于qPCR原始結果的質量。
qPCR結果的評價指標
•溶解曲線，是qPCR結果判定的第—要素。它的作用是判定目的基因是否得到擴增。理論上，當反應體系中僅是目標基因的擴增，才是有效擴增。
•標準曲線，是qPCR結果判定的金標準。（在溶解曲線判定為特異性擴增后）它的作用是測定引物的擴增效率及試劑的檢測上下限。根據文章發(fā)表對于qPCR數據的要求，擴增效率應在90-110%。
•擴增曲線，是直接生成qPCR定量的數據，即Ct值。從試劑對比角度而言，Ct值大小常被用于判定試劑擴增效率的高低。
產品描述
Hieff Unicon® Power qPCR SYBR Green Master Mix，這是一款旨在解決諸多qPCR實驗常見疑難問題的qPCR試劑：
•它減少了大量引物驗證的預實驗工作，是一款具備強引物兼容性的Mix，
•它明確了qPCR溶解曲線峰型的標準——“單峰的形狀”，對于“什么溶解曲線是好的溶解曲線”的解讀具有參考意義，
•它讓時間不再碎片化，1次體系配制，24 h時間自由支配
產品特點
□引物兼容性強：針對遵循qPCR引物設計原則設計的引物，使用Hieff Unicon® Power 引物使用率可達97%；
□模板加入量靈活：可檢測10-107個拷貝個數的基因片段；
□特異性高：標準溶解曲線峰型，有效避免“胖”峰、“多”峰的出現；
□穩(wěn)定性強：產品經50次反復凍融驗證，擴增性能無變化；
□操作靈活：配制好的qPCR反應液4℃保存24 h，擴增性能無變化；
□擴增時間短：每個擴增循環(huán)中，退火、延伸一步完成，用時15 sec。
產品性能展示
1. 超高特異性，簡化了qPCR實驗的引物設計
圖1. Hieff® Unicon Power預混液實現了引物的高特異性擴增 以293T細胞cDNA為模板，利用Prime5軟件設計200bp擴增長度的片段（GC含量：30%-70%）的引物共1000對，隨機挑選88對，使用Hieff Unicon® Power預混液測定引物的擴增特異性。通過溶解曲線分析，88個檢測片段中有86個（97.7%）目標片段有效擴增，說明Hieff Unicon® Power預混液引物兼容性強，具備高特異性擴增、高檢出率的特點。
2. 超高特異性，保證了Ct值的真實性
圖2. Hieff® Unicon Power預混液擴增高度特異，Ct值結果可信度高 以1 ng人gDNA為模板，使用不同品牌預混液按照標準擴增程序，擴增5個目的基因片段，經瓊脂糖凝膠電泳分析擴增產物情況。結果顯示Hieff Unicon® Power預混液針對不同靶標基因均可以高特異性擴增，得到可信的靶標片段Ct值。
3. 檢測范圍寬廣，模板添加不再糾結
圖3. Hieff® Unicon Power預混液可有效檢測6個數量級范圍的模板量 以質粒DNA為模板，10倍梯度稀釋（107-101 拷貝/μl），擴增IL23R基因。結果顯示Hieff Unicon® Power預混液擴增特異，線性相關性高，可在寬廣的定量區(qū)域內獲得良好的線性關系。
4. 良好的穩(wěn)定性，讓體系配制更加靈活：
| 凍融次數 | 0次 | 10次 | 30次 | 50次 |
| Ct均值 | 22.97 | 22.87 | 22.99 | 22.84 |
| △Ct | - | -0.09 | 0.02 | -0.12 |
| 4℃保存時間 | 0 h | 24 h | 48 h | 72 h |
| Ct均值 | 22.83 | 22.89 | 23.05 | 23.16 |
| △Ct | - | 0.06 | 0.22 | 0.33 |
圖4. Hieff® Unicon Power預混液及其配制體系穩(wěn)定性俱佳 以1 ng 人gDNA為模板，使用Hieff Unicon® Power預混液在不同凍融次數或體系配制后4℃放置不同時間條件下，檢測TFRC基因擴增情況。結果顯示Hieff Unicon® Power預混液經50次反復凍融或體系配制后4℃保存24h，擴增性能無變化（溶解曲線圖數據未做展示）。
5. 兼容快速程序與標準程序：
| 30%GC-1號 | 30%GC-2號 | 50%GC-1號 | 50%GC-2號 | 70%GC-1號 | 70%GC-2號 | |
| 標準程序 | 23.4 | 22.79 | 23.79 | 23.52 | 23.23 | 23.60 |
| 快速程序 | 23.29 | 23.04 | 23.8 | 23.57 | 23.48 | 23.52 |
| △Ct | 0.11 | 0.25 | 0.01 | 0.05 | 0.15 | 0.08 |
標準程序 快速程序
95℃ 5 min 95℃ 30 sec
95℃ 10 sec 95℃ 10 sec
60℃ 30 sec 40 Cycles 60℃ 15 sec 40 Cycles
圖6. Hieff® Unicon Power預混液讓擴增時間大大縮短 以1 ng人gDNA為模板，擴增不同GC基因片段（30-70%），比較Hieff Unicon® Power預混液在標準程序和快速程序下的擴增效果。結果顯示Hieff Unicon® Power預混液可兼容快速擴增程序和標準擴增程序，使用快速程序可縮短擴增時間。
常見問題
Q：如何選擇產品？
A：
| 產品名稱 | 貨號 | 特異性 | 擴增效率 | 靈敏度 | 性價比 |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix | 11195ES | ★★★★★ | ★★★★☆ | ★★★☆☆ | ★★★☆☆ |
| Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix | 11198ES | ★★★★☆ | ★★★★☆ | ★★★★☆ | ★★★★☆ |
| Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix | 11201ES | ★★★★☆ | ★★★★★ | ★★★☆☆ | ★★★★★ |
Q：Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix產品可應用于哪些實驗？
A：可用于對特異性要求比較高或較難實現特異性擴增的基因片段。這款產品極大程度上避免了引物二聚體、非特異性擴增的出現，特別適合于引物中有單個堿基不同的擴增。
Q：建議的模板加入量？
A：20 μL反應體系，未經稀釋的cDNA加入量建議不超過2 μL。
Q：試劑如何儲存及保質期？
A：建議-20℃保存，有效期1年。
訂購信息
| 產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法，No Rox) | 11195ES08 | 5ml | 1653.00 | 663.00 |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法，Low Rox) | 11196ES08 | 5ml | 1653.00 | 663.00 |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法，High Rox) | 11197ES08 | 5ml | 1653.00 | 663.00 |
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| Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox ) | 11201ES08 | 5 ml | 740.00 | 498.00 |
| Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) | 11202ES08 | 5 ml | 740.00 | 498.00 |
| Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) | 11203ES08 | 5 ml | 740.00 | 498.00 |
HB190306
