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鏈霉親和素系列專題
—— 一品多用，實現(xiàn)大價值
一 背景介紹
鏈霉親和素是一種來源于阿維丁鏈霉菌（streptomyces avidinii）的生物素結合蛋白質(zhì)，其非特異性結合遠比親和素低，且與蛋清親和素在中性pH值具有凈正電荷和包含大約7%的碳水化合物相比，鏈霉親和素蛋白具有在中性pH值幾乎沒有凈電荷，不含有碳水化合物等更有利的化學性質(zhì)，所以它被廣泛用來作為抗生物素蛋白的替代品。
二 產(chǎn)品特點
四聚體結構：鏈霉親和素同源四聚體的形式存在，大小為66Kda；
親和力強：每分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結合，兩者之間的親和力極為強烈；
用途廣：鏈霉親和素-生物素復合物的解離常數(shù)處于 10 mol/L 數(shù)量級，這一性質(zhì)常用于分子生物學用途；在大多數(shù)應用中，可以與抗生素蛋白抗體相互替代。
提?。?/span>由streptomyces avidinii菌提純獲得；
圖1鏈霉親和素
三 產(chǎn)品應用
應用一 鏈霉親和素純化樹脂
1 應用原理
基于鏈霉親和素與生物素之間的相互作用，將鏈霉親和素高度交聯(lián)于6%瓊脂糖上，*的制備工藝使其具有更高的物理化學特性，可以耐受更高的壓力，在相對較高的流速下，實現(xiàn)對目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。
圖2 鏈霉親和素樹脂的純化原理
2 Yeasen致力于為您提供效率高的產(chǎn)品，為您純化得到更的蛋白。
圖3 鏈霉親和素樹脂純化后的蛋白
3 常見問題
問題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過高 | 填料被堵塞 | 清洗樹脂。 |
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，或離心去除。 | ||
樣品太黏稠 | 樣品中含高濃度的核酸，延長破碎時間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5µg/ml），Mg2+(終濃度1mM)，冰上孵育10-15min | |
緩沖液太黏稠 | 有機試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會引起反壓增高，降低操作流速。 | |
洗脫組分中無目的蛋白 | 過度的裂解使目的蛋白變性 | 使用溫和的裂解條件，實驗條件以經(jīng)驗為準。 |
目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀 | 在細胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10 mM | |
目的蛋白沒有*洗脫下來 | 洗脫體積太少 | 增加洗脫液體積，減小洗脫流速。 |
洗脫液中鹽酸胍的pH 發(fā)生改變 | 使用新鮮配制的洗脫液 | |
洗脫液孵育時間不夠 | 增加洗脫液與凝膠的孵育時間 |
應用二 熒光基團及酶偶聯(lián)物標記的鏈霉親和素
圖4 不同標記的鏈霉親和素
1 酶偶聯(lián)物標記的鏈霉親和素
• 辣根過氧化物酶標記的鏈和親霉素
1）由高純度的鏈霉親和素和辣根過氧化物酶，通過特殊的偶聯(lián)技術生產(chǎn)；
2）保持了過氧化物酶的高比活性。
應用于：免疫組化（IHC）、免疫細胞化學（ICC）、原位雜交（ISH）等領域。
推薦使用濃度：0.01-0.1 µg/mL for WB（化學發(fā)光法）；1-2µg/mL for ELISA，HC/ICC，WB(底物顯色
• 堿性磷酸酶標記鏈霉親和素
1）適合于固相分析，組織/細胞染色系統(tǒng)和印跡應用，選擇特定的共價連接；
2）綴合物穩(wěn)定并高活性。
應用于：免疫組化（IHC）、免疫細胞化學（ICC）、酶聯(lián)免疫斑點法（ELISPOT）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、原位雜交（ISH）及印跡應用。
推薦使用濃度：1-2 µg/mL for ELISA， IHC/ICC；0.1-1 µg/mL for WB
2 熒光基團標記的鏈霉親和素
• Fluor®熒光素標記鏈霉親和素
1）推薦用于常規(guī)免疫熒光；
2）高度純化并具有非常低的非特異性結合特性；
3）對生物素具有較高的親和力；
應用于：免疫熒光（IF）、原位雜交（ISH）、流式細胞術（Flow Cyt）。
推薦使用濃度：0.5-2 µg/mL（IF）
• DyLight™ 染料標記鏈霉親和素
1）在免疫熒光、原位雜交或流式細胞術等應用中可用于檢測生物素化的二抗和其他大分子；
2）高度純化并具有非常低的非特異性結合特性；
3）對生物素具有*的親和力；
4）高光穩(wěn)定性、pH不敏和更亮的熒光；
應用于：免疫熒光（IF）、原位雜交（ISH）、流式細胞術（Flow Cyt）。
推薦使用濃度：0.5-2 µg/mL（IF）
四 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品系列 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
鏈霉親和素純化系列 | Streptavidin Agarose Resin 6FF 鏈霉親和素瓊脂糖純化樹脂 | 20512ES08 | 5 mL | 1586.00 |
20512ES25 | 5 mL×5 | 6356.00 | ||
20512ES60 | 100 mL | 16796.00 | ||
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML 生物素分子純化預裝柱，1ML | 20513ES03 | 1 mL | 428.00 | |
20513ES08 | 1 mL×5 | 1328.00 | ||
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML 生物素分子純化預裝柱，5ML | 20514ES08 | 5 mL | 1158.00 | |
20514ES25 | 5 mL×5 | 4958.00 | ||
酶偶聯(lián)物標記的鏈霉親和素 | HRP Streptavidin 辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素 | 35105ES60 | 100 µL | 436.00 |
AP Streptavidin 堿性磷酸酶標記鏈霉親和素 | 35106ES60 | 100 µL | 436.00 | |
鏈霉親和素 | Streptavidin鏈霉親和素 | 35101ES03 | 1 mg | 326.00 |
35101ES08 | 5 mg | 876.00 | ||
35101ES10 | 10 mg | 1466.00 | ||
35101ES60 | 100 mg | 2856.00 | ||
35101ES80 | 1 g | 9586.00 | ||
熒光基團標記的鏈霉親和素 | DyLight 405™標記鏈霉親和素 DyLight 405™ Streptavidin | 35102ES60 | 100 µL | 436.00 |
Alexa Fluor® 488標記鏈霉親和素 Alexa Fluor® 488 Streptavidin | 35103ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Alexa Fluor® 647標記鏈霉親和素 Alexa Fluor® 647 Streptavidin | 35104ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Alexa Fluor® 594標記鏈霉親和素 Alexa Fluor® 594 Streptavidin | 35107ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Cy3標記鏈霉親和素 Cy3-conjugated Streptavidin | 35108ES80 | 1 mg | 1988.00 |
HB190724
