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EdU系列熒光檢測產(chǎn)品

2020-6-12  閱讀(1086)

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EdU系列熒光檢測產(chǎn)品

       ------點亮你的視野!


想做細胞增殖、細胞成像、流式分析、細胞示蹤、DNA損傷修復(fù)、病毒增殖活性檢測觀察怎么辦? 



免疫法、染料法、同位素法……
免疫法的抗體太貴、染料法染色不清晰、同位素法太危險……



小翊來幫您,全新EdU系列熒光探針,點亮你的視野,讓你看的更清晰!



 

>>>背景介紹
測定DNA合成情況是細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA復(fù)制及修復(fù)、信號通路等研究常用方法之一,用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物(BrdUEdU),兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,EdU因為其*的炔羥基團可以與一些熒光染料發(fā)生“Click”化學反應(yīng),無需變形,從而將細胞標記上熒光,因此應(yīng)用更廣泛。
 
EdU 檢測增殖細胞的特點及原理
EdU(5ethynyldeoxyuridine,5乙.炔基脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物,其化學結(jié)構(gòu)特點是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與5位C原子相連的甲基被乙.炔基取代,在S期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復(fù)制的DNA鏈中。
EdU在細胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以有效地檢測處于S期的細胞百分數(shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click”化學反應(yīng)(點擊法),從而將增殖的細胞標記上熒光??捎糜诩毎上?、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等,EdU亦適用于活體注射,穩(wěn)定,對活體*。
與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,EdU檢測法更簡單、更快速、更準確,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。

圖1:EdU滲入DNA分子過程


>>>什么是點擊法”
基于EdU的點擊法標記技術(shù)是由銅催化的疊氮化物-炔烴環(huán)加成反應(yīng)(圖2),將其應(yīng)用于細胞的原位標記需兩步過程。首先,其中一個生物反應(yīng)配體是由疊氮化物或炔烴與構(gòu)件(如核苷酸,核苷,氨基酸,單糖或脂肪酸)連接構(gòu)成;隨后將另一是由熒光染料、生物素或其他檢測試劑連接的互補炔烴或疊氮化物構(gòu)成的反應(yīng)配體在催化劑銅的存在條件下點擊”到位,完成反應(yīng)
點擊化學與使用溴脫氧尿苷(BrdU)檢測法不同,EdU點擊檢測法不是基于抗體,無需DNA變性即可檢測摻入的核苷。EdU點擊檢測法可以與R-PE、GFP等熒光蛋白復(fù)用提力,該技術(shù)的優(yōu)勢在于化學方面*的小分子和低背景的標記物以及檢測基團之間特異性共價反應(yīng)。小分子的疊氮化物試劑可以有效地接觸DNA而無需對細胞進行破壞處理。進而簡化了測定流程并且獲得的結(jié)果與使用傳統(tǒng)的BrdU相似或更好

圖2:Click-iT EdU點擊法檢測核酸過程


>>>EdU系列產(chǎn)品特點
熒光染料可以在銅離子催化下同EdU發(fā)生“Click”化學反應(yīng),將增細胞標記上相關(guān)的熒光。可用于細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測以及病毒增殖活性檢測等,EdU亦適用于活體注射,穩(wěn)定,對活體*。

EdU檢測的優(yōu)點:

  • — 僅需EdU孵育;細胞固定化;熒光檢測三步;
  • — 不到3h完成檢測
  • — 標記率高且無需變性,更好地保護細胞形態(tài);
  • — 允許與多種抗體、熒光染料同時標記;
  • — 細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、病毒增殖活性檢測等。


>>>EdU系列產(chǎn)品檢測結(jié)果
1、Click-iT EdU熒光成像觀察(綠色、紅色、遠紅色)

         

2、Click-iT EdU流式細胞儀觀察(綠色、紅色、遠紅色)



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參考資料
1. Chehrehasa F, Meedeniya AC, Dwyer P, Abrahamsen G, Mackay-Sim A. EdU, a new thymidine analogue for labelling proliferating cells in the nervous system. J. Neurosci. Methods. February 2009, 177 (1): 122–30. PMID 18996411doi:10.1016/j.jneumeth.2008.10.006.
2.Cavanagh, Brenton; Walker, T. Norazit, A. Meedeniya, A. C. Thymidine analogues for tracking DNA synthesis.. Molecules. September 2011 15, 16 (9): 7980–93. PMID 21921870.
3.羅濤, 王彤敏, 李力燕. EdU與BrdU在檢測細胞增殖中的特點及應(yīng)用進展[J]. 重慶醫(yī)學, 2015(32).

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