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精品推薦|您還在為核酸殘留的問題而煩惱嗎？
核酸殘留是生物樣本制備中常常遇到的問題。在蛋白純化的過程中，如果您提取的蛋白粘度很高、蛋白純化的得率很低、蛋白檢測的結(jié)果很差，那么您的樣本可能遭受了核酸殘留的污染。
一、快速解決蛋白中核酸殘留問題，能帶來什么收益？
（1）契合病毒文庫構(gòu)建，提高測序覆蓋率
并且研究者提供了一種可獲得HIV測序文庫的方案HIV-SMART，其中全能核酸酶的運(yùn)用，可顯著提高HIV病毒測序覆蓋度，且不影響病毒核酸的回收率。如下圖：
圖1 （+）添加和（-）不添加全能核酸酶處理的CHU1756NGS覆蓋圖[1]
（2）降低細(xì)胞破碎后的粘度
全能核酸酶可以降解所有形式的核酸，降低細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分離效果，使之易于過濾（尤其是超濾），利于下游層析純化操作。
圖2 細(xì)胞裂解液Benonase處理（A）和未處理（B）比較圖
（3）提高生化分析樣品的回收率
在ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程中，用全能核酸酶處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，并提高回收率。
圖3小鼠腦核蛋白Benonase處理（A）和未處理（B）雙向電泳比較圖[2]
（4）核酸去除已經(jīng)走入CAR-T治療相關(guān)行業(yè)（慢病毒包裝）
二、翊圣全能核酸酶，匹配市場應(yīng)用，快速解決核酸殘留！
翊圣生物研發(fā)團(tuán)隊(duì)利用—流的基因工程改造技術(shù)，研制而成的核酸去除的—全能核酸酶，可高效降解任何形式（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀）的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性，能有效降低蛋白樣品粘度，去除蛋白樣品中核酸的殘留，且無蛋白酶活性殘留。既保證了產(chǎn)品的純度與酶活，又確保了產(chǎn)品的穩(wěn)定性，目標(biāo)客戶攘括工業(yè)端與科研端兩大科學(xué)研究鏈，可滿足廣大生物研究者的基本需求。
（1）嚴(yán)格把控，品質(zhì)優(yōu)先
圖4 核酸酶純度驗(yàn)證（Purity＞90%） 圖5 全能核酸酶酶活效率驗(yàn)證（＞250U/mg）
（2）核酸酶*特性
a、耐受性強(qiáng)
能夠與多種細(xì)胞裂解液同時(shí)使用，如RIPA；與含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。
試劑 | 耐受劑量 | 耐受程度 |
鹽酸胍 | >100 mM | *抑制Benzonase活性 |
EDTA | 1 mM | 部分抑制Benzonase活性 |
5 mM | 活性喪失90% | |
PMSF | 1 mM | 不會抑制Benzonase活性 |
Triton® X-100 | 濃度<0.4% | 保持70%的活性 |
濃度<0.4%<1% | 活性急劇降低 | |
濃度＞1% | 活性喪失70% | |
SDS | 濃度在0.1%~1% | 活性急劇降低 |
尿素 | >6 M | 活性急劇降低 |
b、操作簡易，輕松使用
推薦使用條件
條件參數(shù) | 條件 | 有效條件 |
Mg2+ | 1-2 mM | 1-10 mM |
pH | 8-9 | 6-10 |
溫度 | 37℃ | 0-42℃ |
DTT | 0-100 mM | >0 mM |
巰基乙醇 | 0-100 mM | >0 mM |
單價(jià)陽離子 | 0-20 mM | 0-150 mM |
磷酸根離子 | 0-10 mM | 0-100 mM |
推薦使用量
實(shí)驗(yàn)類型 | 蛋白電泳樣品 | 藥物生產(chǎn)-1g | 疫苗、病毒生產(chǎn)-1L | 細(xì)胞培養(yǎng)-1L |
推薦產(chǎn)品 | Benzonase（科研級，20156） | Benzonase（無內(nèi)毒素級，20125） | ||
低要求 | 125 U（0.5 µL） | 25 U/mL（1 µL） | 0.1 U/mL（0.4 µL） | 0.1 U/mL（0.4 µL） |
建議用量 | 500 U（2 µL） | 250 U/mL（10 µL） | 25 U/mL（100 µL） | 5 U/mL（20 µL） |
孵育時(shí)間 | 通常作用時(shí)間37℃在15~60 min；25℃在30~120 min； | |||
注：以上僅僅是推薦，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)自主摸索///優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件。 | ||||
（3）FAQ——如何擺脫后續(xù)核酸酶干擾？
措施1：采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制全能核酸酶活性，條件會造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等；
措施2：對于帶某種標(biāo)簽的Benzonase核酸酶可通過相應(yīng)的標(biāo)簽蛋白純化樹脂直接去除，去除率>95%；
措施3：對于不帶標(biāo)簽的Benzonase核酸酶，可通過色譜純化去除核酸酶，然后可通過檢測殘留活性或ELISA檢測來判斷去除是否成功。
三、產(chǎn)品訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Benzonase Nuclease全能核酸酶 | 20156ES25 | 25 KU |
20156ES50 | 50 KU | |
20156ES60 | 100 KU | |
Benzonase Nuclease (Endotoxin-free)? 全能核酸酶（無內(nèi)毒素） | 20125ES25 | 25 KU |
20125ES50 | 50 KU | |
20125ES60 | 100 KU | |
Benzonase Nuclease (GMP)? 全能核酸酶（GMP級） | 20127ES25 | 25 KU |
20127ES50 | 50 KU | |
20127ES60 | 100 KU |
四、文獻(xiàn)引用
[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.
[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.
