目前有多種動(dòng)物模型被廣泛用于研究炎癥性腸炎（inflammatory bowel disease，IBD）的病因、發(fā)病機(jī)制及測試新開發(fā)藥物藥效等，尤其以葡聚糖硫酸鈉鹽（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS MW:36000~50000）結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）模型應(yīng)用*。

圖1 DSS潰瘍病結(jié)腸炎模型發(fā)展歷程

通過給予動(dòng)物自由飲用不同濃度的DSS（MW:36000~50000）水溶液，根據(jù)用藥時(shí)間及用藥周期可制成急性和慢性兩種結(jié)腸炎模型。該模型癥狀表現(xiàn)與人類UC極為相似，主要表現(xiàn)為腹瀉、黏液樣便、糞便潛血、肉眼血便、重量減輕、活動(dòng)度減少，毛色變差等。

1、癥狀表現(xiàn)與人UC極度相似，可用于研究急、慢性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，也可用于藥物的藥效研究。

2、自由飲用DSS水溶液的建模方式，簡單易行，成模率高，重復(fù)性強(qiáng)。

3、用不同濃度的DSS、給藥時(shí)間和給藥頻率，可以實(shí)現(xiàn)急性和慢性兩種結(jié)腸炎模型。模型持續(xù)時(shí)間長，體現(xiàn)了急性向慢性轉(zhuǎn)化的動(dòng)態(tài)過程，解決了UC的慢性化和維持問題，這是以前許多模型的。

4、多種屬動(dòng)物中均可造模：小鼠、大鼠、斑馬魚、豬、果蠅等。

5、聯(lián)合氧化偶氮甲烷 (azoxymethane, AOM)用藥，可用于誘發(fā)結(jié)腸炎相關(guān)性癌癥 (colitis associated cancer, CAC) 動(dòng)物模型，成功模擬IBD誘發(fā)CAC的過程。

1、小鼠造模

1）BALB/c小鼠，雌，6-8周，25 g；

2）用無菌水配置3% DSS飲用水，然后用0.22 μm的濾膜過濾；

3）給小鼠連續(xù)飲用7天，HE染色；

4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：小鼠的組織水腫充血，有明顯的炎癥現(xiàn)象。

圖2 DSS急性結(jié)腸炎切片HE染色結(jié)果

2、斑馬魚造模

1）將斑馬魚胚胎培養(yǎng)在含甲基藍(lán)的E3胚胎培養(yǎng)基中，28.5 ℃，培養(yǎng)至1 dpf；

2）用E3培養(yǎng)基配置0.5% DSS飲用水，然后用0.22 μm的濾膜過濾；

3）用0.5%的DSS處理斑馬魚，從3 dpf處理到6 dpf。

4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：0.5%的DSS藥物處理均會(huì)導(dǎo)致斑馬魚肝臟顏色變深，產(chǎn)生炎癥應(yīng)激。

圖3 DSS導(dǎo)致斑馬魚肝臟產(chǎn)生炎癥反應(yīng)

3、豬造模

1）四到五天大的約克郡小豬，實(shí)驗(yàn)組：灌注DSS，對(duì)照組：灌注生理鹽水

2）每只小豬每日攝入量1.25g DSS/kg，灌注5天

3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：灌注DSS后，實(shí)驗(yàn)組的血漿D-甘露醇攝取率顯著高于對(duì)照組，表明小豬出現(xiàn)了肉眼可見的腸炎癥狀。

圖4 DSS誘導(dǎo)致小豬體內(nèi)D-甘露醇濃度高于對(duì)照組

4、果蠅造模

1）將5~10日的雌果蠅放在一個(gè)裝有2.5×2.5×1cm的空小瓶中培養(yǎng)中，用5%蔗糖溶液潤濕的3.75-cm色譜紙（Fisher）進(jìn)料介質(zhì)；

2）用5%的蔗糖溶液分別配制含有不同成分的喂食培養(yǎng)基，類別包括各含3%的DSS，25 μg/ml博霉素；

3）果蠅放入含有層析紙的瓶中，29℃培養(yǎng)三天，期間每天將存活的果蠅移入含有新鮮培養(yǎng)基的空瓶中；

4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：DSS有致死的功能，且DSS誘導(dǎo)ISC前體細(xì)胞增殖。

圖5 DSS誘導(dǎo)果蠅中ISC前體細(xì)胞增殖

1、疾病活躍指數(shù)評(píng)分（Disease Activity Index, DAI score）

從三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)估打分，分別為體重、糞便粘稠度、糞便潛血等指標(biāo)，DAI評(píng)分為三個(gè)指標(biāo)之和。

表2 DAI評(píng)分細(xì)則

2、組織學(xué)變化評(píng)分

組織學(xué)變化評(píng)分為上述各指標(biāo)之和，在急性結(jié)腸炎模型中淋巴結(jié)形成不做評(píng)分。組織學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)方法為HE染色（Cat.NO：60524ES60）。

表3 組織學(xué)變化評(píng)分

3、結(jié)腸長度

急性結(jié)腸炎模型中，第8天可檢測到結(jié)腸長度縮短；慢性結(jié)腸炎模型中，結(jié)腸長度縮短更加明顯。

4、總結(jié)

DSS UC動(dòng)物模型構(gòu)建應(yīng)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索建模條件，建議預(yù)實(shí)驗(yàn)每組樣本8-10只，并設(shè)立對(duì)照組。通常出現(xiàn)體重減輕、稀便、腹瀉、血便或糞便潛血、潰瘍可視為DSS藥物有效，造模成功。

翌圣DSS（Cat.NO：60316ES，MW:36000~50000）廣泛應(yīng)用于UC模型的構(gòu)建。我們發(fā)現(xiàn)急性結(jié)腸炎成模時(shí)間主要集中在7天左右，效果十分顯著。下表是部分客戶的數(shù)據(jù)反饋。

表4 用DSS構(gòu)建不同類型的腸炎模型

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、癥狀與人類UC高度相似：可用于研究結(jié)腸炎發(fā)生機(jī)制和藥效研究。

2、成模率高：自由飲用DSS水溶液，簡單易行、重復(fù)性強(qiáng)。

3、可構(gòu)建多種結(jié)腸炎模型：急性結(jié)腸炎、慢性結(jié)腸炎，還可以聯(lián)合AOM構(gòu)建結(jié)腸炎相關(guān)性癌癥（CAC）模型。

4、適用于多種屬動(dòng)物造模：小鼠、大鼠、斑馬魚、豬、果蠅等。

5、安全性高：DSS可被自然生態(tài)系統(tǒng)降解，對(duì)環(huán)境安全；

6、純度高：高純度（98%），硫含量17-19%；

無論急性DSS結(jié)腸炎模型還是慢性DSS結(jié)腸炎模型，腸炎嚴(yán)重程度與成功與否均與小鼠種屬（不同基因背景）、DSS濃度、給藥周期等相關(guān)。

表5 DSS結(jié)腸炎造模常見問題

熱賣產(chǎn)品，建模效率與進(jìn)口產(chǎn)品一致，產(chǎn)品價(jià)格低至進(jìn)口價(jià)格的1/3，大量現(xiàn)貨庫存。

雨蛙素（Caerulein）是一種功能和組成上類似于膽囊收縮素（cholecystokinin，CCK）的胃調(diào)節(jié)分子，能夠刺激胃、膽管和胰腺分泌。雨蛙素可用于研究由NF-κB上調(diào)蛋白如細(xì)胞間黏附分子（ICAM-1），炎癥相關(guān)因子如NADPH氧化酶以及Janus激酶介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。并已經(jīng)成功運(yùn)用于大鼠、小鼠、狗和敘利亞倉鼠等動(dòng)物急性胰腺炎（AP）模型的建立。

造模優(yōu)勢：

1、操作簡單

2、成本較低

3、造模迅速

4、給藥方式多

造模機(jī)制：

1、通過刺激胞內(nèi)NF-KB來上調(diào)胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞間黏附分子（ICAM-1）表達(dá)。表面ICAM-1反過來促進(jìn)中性粒細(xì)胞粘附到腺泡細(xì)胞上從而增強(qiáng)胰腺炎癥效應(yīng)；

2、通過誘使消化酶分泌失調(diào)和細(xì)胞質(zhì)空泡化導(dǎo)致腺泡細(xì)胞死亡和胰腺水腫，從而誘導(dǎo)胰腺炎；

3、活化炎癥促進(jìn)因子。

相關(guān)試劑

翌圣提供十肽分子形式，純度≥97% (HPLC)雨蛙素；造模效率高，*，現(xiàn)貨供應(yīng)。

鏈脲佐菌素（Streptozocin，STZ）是從某種鏈霉菌Aureobasidium pullulans中產(chǎn)生的抗腫瘤類抗生素，也可人工合成。常被用于治療胰腺癌。同時(shí)，STZ對(duì)一定種屬動(dòng)物的胰島β細(xì)胞有選擇性破壞作用，能誘發(fā)許多動(dòng)物產(chǎn)生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造動(dòng)物模型。在抗白血病、DNA甲基化、抗腎炎等方面被廣泛研究。

1、動(dòng)物的準(zhǔn)備

盡量選用雄性動(dòng)物，雌性含有激素影響建模效率。有研究顯示，雌性動(dòng)物成模率差，而且可能會(huì)比雄性出現(xiàn)更高死亡率，尤其是I型。

I型糖尿病（Type I diabetes）一般按照體重選擇即可，推薦大鼠170-200g，小鼠17-22g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1~2周后空腹注射STZ，成模率相對(duì)理想。

II型糖尿病（Type II diabetes）對(duì)于大鼠（比如SD/Wistar），選取4-5周齡，體重在90-100g，高脂（高糖）飼料喂養(yǎng)4-6周體重約達(dá)240-280g。 對(duì)于小鼠（比如C57/ICR/昆明小鼠），選取4-5周齡，體重在16-20g，高脂（高糖）飼料喂養(yǎng)4-6周體重約達(dá)30-35g。 對(duì)于新購入動(dòng)物或更換飼養(yǎng)環(huán)境需要先用普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，然后再選擇適合周齡/體重動(dòng)物轉(zhuǎn)用高脂高糖飼料繼續(xù)喂養(yǎng)。從模型建立成功率來看，大鼠推薦用SD，小鼠推薦C57。

2、造模前的喂養(yǎng)

造膜前的喂養(yǎng)，Ⅰ型糖尿病模型成模比較快，通常大鼠在普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后即可開始造模；Ⅱ型糖尿病模型：高脂飲食誘導(dǎo)加小劑量STZ。造模前喂以高脂(高糖)飼料，誘發(fā)出胰島素抵抗。

3、試劑的準(zhǔn)備

①高脂(高糖)飼料

高脂(高糖)飼料成分：其中含10%蔗糖，10%豬油，5%膽固醇

由基礎(chǔ)鼠飼料加蔗糖、煉豬油和蛋黃按質(zhì)量比搭配制作高脂高糖飼料：其比例為豬油18 % ,蔗糖20 % ,蛋黃3 % ,基礎(chǔ)飼料59 %。

②STZ溶劑——檸檬酸鈉緩沖液的配制

A液和B液的配制：稱取檸檬酸(FW:210.14) 2.1g加入雙蒸水100mL中配成A液；稱取檸檬酸鈉(FW:294.10) 2.94g加入雙蒸水100mL中配成B液。

檸檬酸鈉緩沖液的配制：將A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），pH計(jì)測定pH值，調(diào)節(jié)pH值到4.2-4.5，即是所需檸檬酸鈉緩沖液。

4、注射前準(zhǔn)備

配制STZ注射液前，STZ凍干粉放置于干燥滅菌瓶內(nèi)，外用鋁箔紙或錫紙包好，與檸檬酸鈉緩沖液一起置于冰浴預(yù)冷，帶到動(dòng)物房備用。

注意：STZ凍干粉從?20°C冰箱取出后，于室溫干燥避光放置10min左右，使其*解凍（很重要）。

5、配制注射液

大鼠過夜禁食（不禁水）后稱重并測血糖濃度。對(duì)大鼠進(jìn)行分組，以便按照動(dòng)物數(shù)目和注射劑量來準(zhǔn)備STZ注射液。以1%濃度（w/V）溶解STZ，過濾消毒，切記STZ*溶解。

注意：

①STZ不穩(wěn)定，易失活，快速稱取后剩余試劑仍要求干燥避光，推薦用干燥鋁箔(或錫箔)紙包裹。

②注射時(shí)若操作不熟練，切忌不可一次性溶解完STZ。建議根據(jù)操作熟練度，分組溶解STZ，比如10只或15只鼠/組。

③亦可提前將STZ按動(dòng)物分組的所需量稱重，分裝。

6、注射

按動(dòng)物空腹體重腹腔或尾靜脈注射。如果注射操作技術(shù)不熟練，應(yīng)兩組交替注射，注射應(yīng)在30分鐘內(nèi)完畢。注意：注射大多要求快速注射。

注意：

Ⅰ型糖尿病模型：大鼠劑量為70～65mg/kg

Ⅱ型糖尿病模型：高糖高脂喂養(yǎng)1～2 個(gè)月的大鼠,STZ 劑量在25～40mg/kg。

7、注射后

注射完STZ后要給予動(dòng)物足夠的水、食物（糖尿病鼠的基本生活特征），需每日換墊料，保持鼠籠干燥。飼養(yǎng)時(shí)，注意避免強(qiáng)日光照射。盡可能勤消毒。

注意：STZ造模后，明顯血糖水平波動(dòng)呈現(xiàn)3個(gè)時(shí)相，一時(shí)性高血糖（1-2h）、短暫低血糖（6-10h）、持續(xù)高血糖（>72h）。必須適當(dāng)補(bǔ)給胰島素和葡萄糖。

與對(duì)照組對(duì)比，統(tǒng)計(jì)以下指標(biāo)：

1、一般性指標(biāo)：出現(xiàn)多飲、多食、多尿現(xiàn)象，體重下降；

2、其他指標(biāo)：空腹血糖、空腹血清胰島素水平、血清胰島素水平、胰島素敏感性、糖耐量等；

3、血清生化指標(biāo)：T-Cho、TG、HDL-C、LDL-C、CR、BUN、Alt等。

4、病理切片：胰腺組織病理切片

1、STZ的品質(zhì)是關(guān)鍵，建模用STZ純度應(yīng)不低于98%（HPLC檢測）。

2、STZ失效：應(yīng)干燥保存，避免受潮。粉末避免長時(shí)間室溫放置，溶解的STZ是非常不穩(wěn)定的，在中性pH值的半衰期為15分鐘。注意用酸性pH值溶解STZ，最好放在冰浴里。

3、腹腔注射是否注射到腸子等臟器。

模型不，建議，再觀察3天，還是不成模型的話，重新注射一次。

1、鼠的體重過低；

2、 一定要保證足夠的飲水量(飲水量不足容易導(dǎo)致死鼠);

3、高血糖和低血糖都會(huì)造成死鼠，避免死鼠可以通過注射胰島素或暫時(shí)補(bǔ)糖，兩種途徑： ①常見為血糖過高。補(bǔ)胰島素法，補(bǔ)一些中效胰島素。例如給諾和靈n或NPH(中性魚精蛋白鋅胰島素),每次2-3個(gè)單位，過了3-5天，大鼠一般死亡率就低了；②補(bǔ)糖法，禁食后的鼠，注射的時(shí)候已經(jīng)處于低血糖狀態(tài)，造模4小時(shí)后腹腔注射20%的葡萄糖，可避免因注射時(shí)血糖過低死鼠；

4、防止動(dòng)物自相殘殺。食物缺乏和供水不足的情況下，會(huì)互相撕殺、啃食同類，所以食物和飲水要供應(yīng)充足，最好是兩路供應(yīng);

5、防止感染。糖尿病大鼠尿量多，墊料潮濕，需要勤換墊料，所以糖尿病大鼠較其他大鼠容易出現(xiàn)感染，特別是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血測血糖等侵入性操作前后，要注意消毒工作。如每次采血測血糖后可用四環(huán)素(或金霉素眼藥膏)局部涂抹處理傷口預(yù)防感染。

糖尿病疾病模型的影響因素包括STZ建模試劑的質(zhì)量、動(dòng)物狀況及給藥方式等。其中，試劑主要性能為純度、穩(wěn)定性、溶解特性等，動(dòng)物狀況主要包括遺傳背景，雌雄，性別，體重，飼養(yǎng)環(huán)境，飲食結(jié)構(gòu)等，給藥方式包括給藥時(shí)間、給藥間隔和給藥途徑。差異化的因素帶來差異化的建模效果。

影響因素標(biāo)準(zhǔn)化是實(shí)現(xiàn)建模目的及建模穩(wěn)定性的保證。理論上，所有的動(dòng)物建模實(shí)驗(yàn)均要求預(yù)實(shí)驗(yàn)。

以STZ誘導(dǎo)糖尿病模型而言，實(shí)驗(yàn)時(shí)STZ的給藥量應(yīng)參照預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，盡量不要盲目按照文獻(xiàn)上或他人的給藥量來直接使用，鼠均重和空腹(低糖狀態(tài))抗藥力、禁食時(shí)長、注射選時(shí)、以及之前飼養(yǎng)過程、測糖選時(shí)等都不相同，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定符合自己實(shí)驗(yàn)鼠的給藥計(jì)量，才是的。

STZ保存、溶解、分裝等使用注意事項(xiàng)，詳見相關(guān)試劑

高成功率：純度≥98%（HPLC測定）；質(zhì)量穩(wěn)定，性價(jià)比高，現(xiàn)貨供應(yīng)，售后保障。

（了解更多STZ造模的使用，可查看翌圣專題文章）

翌圣常用試劑產(chǎn)品線：恪守品質(zhì) 口碑優(yōu)良 產(chǎn)線豐富 貨期迅速 保障售后

地址：

Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS） 結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽 MW:36000~50000

Caerulein 雨蛙素

鏈脲佐菌素

產(chǎn)品線已發(fā)表文章(部分)：

[1] Li, Y., Dong, J., Xiao, H., Zhang, S., Wang, B., Cui, M., & Fan, S. Gut commensal derived-valeric acid protects against radiation injuries. Gut Microbes,.2020 .1–18.IF=10.245

[2] Wang Y, Jia M, Yan X, et al. Increased neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) promotes airway remodelling in chronic obstructive pulmonary disease[J]. Clinical Science, 2017, 131(11): 1147-1159.IF=6.124

[3] Su J, Sun H, Meng Q, et al. Enhanced Blood Suspensibility and Laser-Activated Tumor-specific Drug Release of Theranostic Mesoporous Silica Nanoparticles by Functionalizing with Erythrocyte Membranes[J]. Theranostics, 2017, 7(3): 523.IF=11.556

[4] Wu J, Lv Q, He J, et al. MicroRNA-188 suppresses G 1/S transition by targeting multiple cyclin/CDK complexes[J]. Cell Communication and Signaling, 2014, 12(1): 66.IF=5.712

[5] Zhang T Q, Wang J W. Shoot Regenerative Capacity Assays in Arabidopsis and Tobacco[J].The Plant Cell, 2015.IF=10.69

[6] Yao C, Ni Z, Gong C, et al. Rocaglamide enhances NK cell-mediated killing of non-small cell lung cancer cells by inhibiting autophagy[J]. Autophagy, 2018, 14(10): 1831-1844.IF=16.016

[7] Fan H, Chen W, Zhu J, et al. Toosendanin alleviates dextran sulfate sodium-induced colitis by inhibiting M1 macrophage polarization and regulating NLRP3 inflammasome and Nrf2/HO-1 signaling[J]. International immunopharmacology, 2019, 76: 105909.IF=4.932

[8] Gao X , Fan W , Tan L , et al. Soy isoflavones ameliorate experimental colitis by targeting ERα/NLRP3 inflammasome pathways[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry, 2020, 83.IF=6.048