—— 研究及產(chǎn)品開發(fā)利器

概述

自2019年末SARS-CoV-2大流行開始，針對(duì)的檢測(cè)和治療研究一刻不曾停歇。但是由于具有較高的危險(xiǎn)性，研究條件苛刻。因此，使用假病毒進(jìn)行研究和產(chǎn)品開發(fā)已經(jīng)成為了檢測(cè)、及藥物研發(fā)中的關(guān)鍵評(píng)價(jià)手段。

假病毒簡(jiǎn)介

假病毒是一種重組病毒，它的基因通常被改變或修飾，以消除其本身表面蛋白的表達(dá)，用另一個(gè)質(zhì)粒表達(dá)替代性表面蛋白，可以感染易感宿主細(xì)胞，但只能在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制一輪。由于病毒表面蛋白在進(jìn)入宿主細(xì)胞中起著關(guān)鍵作用，因此假病毒表面蛋白的構(gòu)象結(jié)構(gòu)與天然病毒蛋白具有高度相似性；然而，與野生型（WT）病毒相比，假病毒的毒力有所減弱，使它們能夠在P2實(shí)驗(yàn)室中安全處理。

SARS-CoV-2是一種正鏈RNA病毒，研究表明，SARS-CoV-2和SARS-CoV都利用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（ACE2）作為宿主細(xì)胞表面受體進(jìn)入靶細(xì)胞。SARS-CoV-2基因組的前三分之二名為ORF1ab區(qū)，其余部分則編碼幾種輔助蛋白和四種結(jié)構(gòu)蛋白，包括棘突（S）糖蛋白、包膜（E）、基質(zhì)（M）和核衣殼（N）蛋白，它們對(duì)維持包膜SARS-CoV-2病毒粒子的結(jié)構(gòu)完整性很重要。將慢病毒載體中的包膜糖蛋白用 S 蛋白替代，可形成模擬感的假病毒。假病毒通過表面 S 蛋白感染靶細(xì)胞并表達(dá)報(bào)告熒光素酶基因。中和抗體可以阻斷 S 蛋白和ACE2 的結(jié)合，從而阻止假病毒對(duì)宿主細(xì)胞的感染【1】。通過檢測(cè)報(bào)告基因熒光素酶的表達(dá)量，能推斷出病毒被阻斷的程度，從而進(jìn)行中和劑的篩選或驗(yàn)證。因此假病毒在作為病毒核酸檢測(cè)試劑盒驗(yàn)證陽(yáng)性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品，中和抗體研究和疫苗開發(fā)，病毒受體研究中代替真病毒進(jìn)行細(xì)胞水平檢。

翌圣生物科技（上海）股份有限公司（以下簡(jiǎn)稱“翌圣生物"）病毒平臺(tái)經(jīng)過科研攻關(guān)，依托慢病毒載體開發(fā)出了滿足不同研究和開發(fā)目的的假病毒相關(guān)產(chǎn)品，助力各領(lǐng)域病毒研究和產(chǎn)品開發(fā)。

利用慢病毒包裝體系構(gòu)建假病毒流程

S蛋白（Spike protein）假病毒

自爆發(fā)以來，作為阻止病毒擴(kuò)散和感染*的手段之一就是疫苗。在注射疫苗之后能夠刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體抵抗真病毒的入侵。其中用于評(píng)估疫苗效果，以及評(píng)價(jià)臨床試驗(yàn)和大規(guī)模接種后疫苗的金標(biāo)準(zhǔn)就是中和抗體（Neutralizing Antibody）檢測(cè)。但是利用真病毒進(jìn)行中和抗體檢測(cè)成本高，危險(xiǎn)性大，檢測(cè)困難。翌圣生物基于慢病毒系統(tǒng)開發(fā)的S蛋白假病毒，病毒表面含有的刺突糖蛋白（S蛋白，Spike protein）,病毒內(nèi)含有GFP及Luciferase報(bào)告基因，方便檢測(cè)。

3.1產(chǎn)品特點(diǎn)：

(1) 表面含有S蛋白，模擬侵入過程

(2) GFP及Luciferase雙報(bào)告系統(tǒng)，方便檢測(cè)

(3) 無自主復(fù)制能力，安全性高

(4) 每批次質(zhì)檢，滴度≥1×106 TU/mL

3.2 產(chǎn)品數(shù)據(jù)：

(1) 病毒感染測(cè)試：

GFP熒光檢測(cè)

10*10-3ml假病毒液                       10*10-7ml假病毒液

（96孔板HEK293T-ACE2細(xì)胞鋪板感染病毒48小時(shí)后檢測(cè)）

Luciferase熒光強(qiáng)度測(cè)定：

SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T-ACE2測(cè)定Luciferase的讀值

(2) 中和抗體效果評(píng)價(jià)：

SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒用于中和抗體效果的評(píng)價(jià)

此外，翌圣生物還能提供過表達(dá)ACE2的HEK 293T細(xì)胞株，以及定制化病毒核酸檢測(cè)用假病毒，從而更好的助力您的中和抗體研究，歡迎咨詢。

Q1：11900病毒的滴度是怎么計(jì)算的？

A：本產(chǎn)品是通過提取病毒核酸之后通過qPCR的方法和質(zhì)?？截惖臉?biāo)準(zhǔn)品對(duì)比進(jìn)行計(jì)算的，一般是1×108/mL以上。

Q2：11900ES 三個(gè)基因序列的選擇依據(jù)是什么？

A：根據(jù)國(guó)家計(jì)量院提供的信息，3個(gè)基因是涵蓋已公布的3個(gè)主要基因：核殼蛋白N基因全長(zhǎng)、包膜蛋白E基因全長(zhǎng)、開放閱讀框1ab （ORF1ab）基因片段。

Q3：假病毒的質(zhì)量穩(wěn)定嗎？

A：每批次假病毒都會(huì)做質(zhì)檢分析，因?yàn)榧俨《局谱鞯墓に嚤容^成熟，因此每批次的數(shù)據(jù)波動(dòng)不大，都在要求范圍內(nèi)。

Q4：S蛋白假病毒的滴度是怎么計(jì)算的？

A：本產(chǎn)品是通過感染細(xì)胞檢測(cè)熒光計(jì)算感染細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)算，1個(gè)熒光細(xì)胞=1活性病毒顆粒。

Q5： S蛋白假病毒和11900有什么區(qū)別？

A：S蛋白假病毒是病毒外殼表達(dá)有刺突蛋白，核酸為報(bào)告基因的假病毒，11900假病毒病毒外殼是VSV-G，核酸是核酸的部分基因序列。

Q6：S蛋白假病毒的核酸是的核酸序列嗎？

A：本產(chǎn)品只有包膜蛋白是的刺突蛋白，核酸序列是GFP和Luciferase標(biāo)簽蛋白的序列。

Q7：你們都有什么毒株的假病毒？

A：目前有野生型，α，β，γ，λ，δ和Omicron突變株的假病毒，以及多種S蛋白點(diǎn)突變的假病毒。

Q8：過表達(dá)ACE2蛋白HEK293T細(xì)胞系是怎么篩選的？

A：通過慢病毒轉(zhuǎn)染篩選的穩(wěn)定細(xì)胞株，帶有嘌呤霉素的抗性基因。

*我們還可以提供包含以下突變位點(diǎn)的假病毒：N354D，V367F，N354D+D364Y，D614G，D614G+I472V，D839Y，V483A，D614G+L5F，L5F，L8V，G1124V，D614G+A831V，D614G+A879S，W436R，N331Q+N343Q，N501Y，N501Y+D614G，K417N，K417N+E484K+N501Y，E484K，E484K+N501Y，K417T+E484K+N501Y，Y453F，N439K，L452R+E484Q，歡迎咨詢訂購(gòu)。

六．參考文獻(xiàn)

【1】Minghai Chen1 and Xian-En Zhang, Construction and applications of SARS-CoV-2 pseudoviruses: a mini review. Int J Biol Sci. 2021; 17(6): 1574–1580.