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近年來，mRNA技術(shù)的發(fā)展應(yīng)用持續(xù)得到關(guān)注。mRNA藥物是通過將編碼抗原蛋白的mRNA接種到人體，利用人體細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)進行表達(dá)合成抗原蛋白，通過抗原蛋白誘導(dǎo)和激活機體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。mRNA藥物以安全、高效、周期短等的優(yōu)勢，能夠同時誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，目前已經(jīng)應(yīng)用在腫瘤、傳染病、罕見病、心血管疾病等多種不同適應(yīng)癥。
※圖片來源于沙利文
mRNA藥物開發(fā)的整個流程大致可以分為幾步：
序列確定&設(shè)計—mRNA體外轉(zhuǎn)錄—包封制備
mRNA體外轉(zhuǎn)錄（In Vitro Transcription, IVT）步驟：
質(zhì)粒DNA 提取&線性化—體外轉(zhuǎn)錄（共轉(zhuǎn)錄加帽）—純化—mRNA原液
目前現(xiàn)有的工藝大都是質(zhì)粒DNA在酶切后進行一步純化，在進行IVT步驟。翌圣生物基于成熟的mRNA 應(yīng)用開發(fā)中心，開發(fā)出：“Onepot mRNA Transcription" 工藝，環(huán)狀質(zhì)粒DNA在酶切后不進行純化，直接投料進行體外轉(zhuǎn)錄操作，也可以得到高質(zhì)量的mRNA原液產(chǎn)品。整個工藝在確保產(chǎn)品和工藝質(zhì)量的前提下，減短了現(xiàn)有工藝的時長。
工藝優(yōu)勢
工藝優(yōu)化，減少IVT步驟，操作更簡單； 物料成本降低，不需酶切后純化物料以及質(zhì)檢； mRNA質(zhì)量&得率未降低。
數(shù)據(jù)展示
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1、 產(chǎn)量數(shù)據(jù)
*：20ul反應(yīng)體系下的mRNA產(chǎn)量
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2、完整度檢測
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3、mRNA加帽率檢測
上圖：HPLC 紫外色譜圖
下圖：解卷積分子量圖譜
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4、mRNA加尾率檢測
上圖：液質(zhì)檢測 TIC 圖譜
下圖： 解卷積分子量圖譜
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5、mRNA細(xì)胞活性檢測
使用one-pot工藝和普通工藝合成的mRNA產(chǎn)物轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞24h后，熒光表達(dá)無差異。
產(chǎn)品列表
| 流程 | 定位 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號 |
| 體外轉(zhuǎn)錄 （試劑盒） | RNA體外轉(zhuǎn)錄 | Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit | 10623ES |
| 一步法mRNA 體外轉(zhuǎn)錄 | T7 High Yield RNA Synthesis Kit for Co-transcription | 10673ES | |
| 體外轉(zhuǎn)錄 （單組分） | 限制性內(nèi)切酶 | BspQI GMP-grade (10 U/μL) | 10664ES |
| BsaI GMP-grade (20 U/μL) | 10661ES | ||
| 10×Digestion buffer 3 GMP-grade | 10667ES | ||
| T7 RNA 合成酶 | T7 RNA Polymerase GMP-grade（250 U/μL） | 10625ES | |
| 無機焦磷酸酶 | Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade(1 U/μL) | 10620ES | |
| Pyrophosphatase, Inorganic GMP-grade (0.1 U/μL) | 10672ES | ||
| RNA 抑制劑 | Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL) | 10621ES | |
| 轉(zhuǎn)錄buffer | 10×Transcription Buffer GMP-grade(Mg2+ free) | 10669ES | |
| 10× Transcription Buffer 2 GMP-grade | 10670ES | ||
| NTP | ATP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10652ES | |
| CTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10653ES | ||
| UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10654ES | ||
| GTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10655ES | ||
| Pseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10656ES | ||
| N1-Me-Pseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10657ES | ||
| DNA消化 | 模板DNA 消化 | Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade | 10611ES |
| RNA純化 | RNA純化 | Hieff NGS® RNA Cleaner | 12602ES |
| mRNA修飾 | 二步法加帽技術(shù) | mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade | 10614ES |
| mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase GMP-grade | 10612ES | ||
| 10× Capping Buffer GMP-grade | 10666ES | ||
| Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL) | 10621ES | ||
| GTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10655ES | ||
| S-adenosylmethionine (SAM)（32mM） | 10619ES | ||
| 共轉(zhuǎn)錄帽類似物 | Cap1-GAG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pG (100mM) | 10677ES | |
| Cap1-GAG m7G(5’)ppp(5’)(2’OMeA)pG(100 mM) | 10678ES | ||
| Cap AU-GAUm7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pU GMP-grade (100 mM) | 10679ES | ||
| 加尾酶 | E.coli poly(A) Polymerase (5 U/μL） | 14801ES | |
| mRNA標(biāo)準(zhǔn)品 | mRNA原液標(biāo)準(zhǔn)品 | Firefly Luciferase-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17101ES |
| eGFP-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17102ES | ||
| OVA -mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17103ES | ||
| mCherry-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17104ES | ||
| 環(huán)狀RNA | 線性RNA 去除 | RNase R (20U/μL) | 14606ES |
