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組織/細(xì)胞RNA提取指南，擺脫選擇綜合征！
核糖核酸（RNA），存在于生物細(xì)胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA的堿基主要有4種，即A（腺嘌呤）、G（鳥嘌呤）、C（胞嘧啶）、U（尿嘧啶），其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T（胸腺嘧啶）。核糖核酸在體內(nèi)的作用主要是引導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。
圖1.DNA和RNA的結(jié)構(gòu)
人體一個(gè)細(xì)胞含RNA約10pg（含DNA約7pg）。在細(xì)胞中，根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉(zhuǎn)運(yùn)RNA），rRNA（核糖體RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA含量低，占細(xì)胞總RNA的1%~5%。核糖體RNA特點(diǎn)含量高，占細(xì)胞總RNA的80%~85%。
表1：RNA的結(jié)構(gòu)和功能
隨著高通量組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，在高等哺乳動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)高達(dá)數(shù)十萬種非編碼RNA，根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能可對(duì)其進(jìn)行科學(xué)分類和系統(tǒng)命名，如tRNA、rRNA、snRNA、snoRNA、siRNA、miRNA、piRNA和lncRNA等。非編碼RNA是當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展最為迅速的前沿領(lǐng)域之一，它不斷更新人們對(duì)生命本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，為生物遺傳育種及人類重大疾病的干預(yù)、防治和藥物研究等提供全新的思路與技術(shù)(Amaral et al，2008)。
圖2.非編碼RNA的生物學(xué)功能（Cell. 2019 Nov 14; 179(5): 1033–1055.）
RNA研究的第一步為RNA提取，高質(zhì)量的RNA是進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RT-PCR等試驗(yàn)的基礎(chǔ)，然而由于RNA單鏈結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性和無處不在的RNA酶，使得RNA在提取過程中容易發(fā)生降解，同時(shí)，傳統(tǒng)的RNA提取方法毒性大，因此，提取出高質(zhì)量的RNA，選擇合適的提取產(chǎn)品非常重要！
對(duì)于常規(guī)的新鮮或凍存的組織、貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞RNA提取，我們MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit 細(xì)胞/組織總RNA提取試劑盒19221ES，適用于10-20 mg動(dòng)物組織或(1-5)×106個(gè)動(dòng)物細(xì)胞的總RNA提取純化。
RNA純度高：配有基因組DNA吸附柱，可有效去除DNA污染；
安 全：無需有毒的酚、氯仿等有機(jī)物抽提；
快速簡便：無需異丙醇或乙醇沉淀操，操作過程30 min完成；
使用方便：全流程室溫操作，無需冰浴和低溫離心。
取106個(gè)雜交瘤細(xì)胞，分別使用19221和TRIzol（貨號(hào)：10606ES）提取總RNA。之后測(cè)定濃度和瓊脂糖凝膠電泳；同時(shí)取2 μL，使用Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit（貨號(hào)：11143ES）進(jìn)行定量測(cè)試小鼠GAPDH。結(jié)果顯示，MolPure® Cell/Tissue RNA Kit能穩(wěn)定提取RNA，RNA產(chǎn)量高，完整度較好。
圖 2.RNA 質(zhì)量和濃度
圖3.一步法反轉(zhuǎn)錄定量結(jié)果 （注：綠色為 19221，藍(lán)色為 Trizol）
老師們可能會(huì)疑問為什么不Trizol或Trizol相關(guān)的產(chǎn)品呢？因?yàn)門RIzol有它固有的缺點(diǎn)：
有難聞的刺鼻氣味
提取過程用到的酚、氯仿都為有毒有機(jī)物
提取時(shí)間長
如果老師們從成本的角度考慮，我們也有性能優(yōu)異的Trizol提取產(chǎn)品。
MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit總 RNA 提取試劑盒（帶離心柱）19211ES是利用MolPure® RNA Column A1和改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法（TRIzol法）來提取樣品中的總RNA，適用于TRIzol法所能提取的所有樣本，包括各種動(dòng)植物、細(xì)菌和細(xì)胞樣品。該試劑盒方便快捷，1 h完成可完成操作，且不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程。
適用范圍廣：可通用動(dòng)物、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等樣品
使用方便：“TRIzol+離心柱"形式，易于操作
快速簡便：操作過程1 h完成
圖 4.RNA 質(zhì)量和濃度
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™ 總RNA提取試劑 10606ES是一種適用于各種動(dòng)植物、細(xì)菌組織、細(xì)胞的總RNA抽提試劑，具有的裂解能力，并有效抑制樣本中RNA的降解，保持RNA的完整性。
TRIeasy™ LS Total RNA Extraction Reagent 液體總RNA提取試劑（同TRIzol LS）19201ES是一種適用于各種動(dòng)植物、酵母、細(xì)菌等液體樣本的總RNA抽提試劑，具有的裂解能力，并有效抑制樣本中RNA的降解，保持RNA的完整性。
MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit細(xì)胞/組織miRNA提取試劑盒 19331ES適用于TRIzol法所能提取的所有樣本，包括各種動(dòng)植物、細(xì)菌組織和培養(yǎng)細(xì)胞中總RNA、miRNA和其他各種小RNA的提取。該試劑盒可選擇提取包含miRNA的總RNA，或只針對(duì)microRNA富集，不包含>200 nt其它RNA，30min可完成單樣本的提取。
