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護航全流程！宿主核酸殘留去除與檢測完整方案
近年來，生物制品已應用到生物醫(yī)藥、生物農業(yè)、生物能源、生物制造、生物環(huán)保等多種領域。隨著生物制品的市場占比越來越大，針對生物制品，國家和相關部門也建立起規(guī)范的質量管理體系和標準，其中宿主細胞核酸殘留問題是備受關注的焦點之一。
生物制品如重組蛋白藥、抗體藥、疫苗、細胞與基因藥物等產品是用連續(xù)傳代的菌種株/細胞株表達的，因而產品內可能會殘存宿主核酸。殘留的宿主細胞核酸可能引發(fā)細胞因增殖失控變?yōu)槟[瘤細胞，也有可能存在感染性病毒基因從而加劇體內免疫反應。為了規(guī)避上述不良后果，從生物制品安全角度和科研需求的層面，進行有效的核酸殘留去除與嚴格的殘留檢測是非常重要的。
我國參照WHO、FDA和歐盟的標準，在藥典中明確規(guī)定酵母、大腸桿菌表達的生物制品中的DNA殘留量不超過10ng/劑，CHO和Vero細胞表達的EPO、狂犬疫苗、乙肝疫苗等不超過100或10pg/劑。
在核酸殘留去除工作中，由于DNA帶有大量的電荷與其他生物大分子結合從而產生聚集（吸附）、包裹作用而難以除去。傳統(tǒng)的方法均存在核酸殘留去除不凈、工作量大、耗時長等缺陷，全能核酸酶則可解決此類難點。
全能核酸酶，又稱非限制性核酸內切酶，是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內切酶。無論是實驗研究，還是工業(yè)生產，全能核酸酶都是目前能夠同時有效去除DNA和RNA的酶。翌圣生物UCF.ME®核酸酶在GMP條件下生產，可高效去除各種樣品中的核酸雜質，廣泛應用于生物醫(yī)學的各個領域。
翌圣生物UCF.ME®核酸酶可降解無論是單鏈、雙鏈、線性、圓形還是超螺旋形式的DNA及RNA，無堿基偏好性。UCF.ME®核酸酶具有的核酸酶活性以及的耐受性，可適用于多種操作環(huán)境，能夠在非常廣泛的條件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF），短時間內就使樣品中所有的游離核酸降解成長度為2-5個堿基的長度的5'-單磷酸寡核苷酸。后續(xù)也可以通過相應的方法去除UCF.ME®核酸酶，不影響后續(xù)實驗。
※可以降解所有形式的DNA和RNA；
※核酸酶活性，樣品中的核酸殘留經(jīng)過短時間處理就能降低到皮克級別；
※穩(wěn)定性高，耐受性強，適應各種操作條件；
※無動物源性、無抗生素；
※GMP條件生產，滿足從研發(fā)到生產的大規(guī)模使用需求；
※審計資料齊全，產品申報無憂。
為了測試產品的使用性能，我們分別測試了2種溫度條件宿主DNA殘留（GAPDH/Actin）和質粒DNA殘留情況（Bla），結果顯示Yeasen UltraNuclease降解DNA的效率與M公司相當。（注：測試樣本為：HEK293+慢病毒質粒）
針對UltraNuclease，我們還進行了使用條件的測試。測試結果如下表。隨著核酸酶使用濃度的升高，所需處理時間成倍性縮短。針對Mg2+濃度、pH、溫度、DTT、巰基乙醇、單價陽離子、磷酸根離子等的最適濃度條件和有效條件我們均作了嚴謹?shù)臏y試。UltraNuclease的耐受性強。
考慮到不同生產或研究過程中涉及眾多的因素有可能會影響UltraNuclease的穩(wěn)定性，我們測定了9大常見因素對酶活的影響。在實際的研究中可以根據(jù)自身反應工藝結合我們的測試數(shù)據(jù)做更加適合的體系優(yōu)化，更大限度的滿足各類特殊需求。
酶類產品通常需要非常嚴格的運輸條件、儲存條件和凍融次數(shù)限制。我們測試了不同溫度條件下該酶的酶活變化情況、反復凍融次數(shù)對酶活的影響以及干冰運輸對酶活的影響。結果顯示，-20℃條件下酶活8周均穩(wěn)定；4℃條件下4周內酶活僅降低20%；37℃條件下酶活可穩(wěn)定2周。另外再-80至25℃之間凍融10次該酶也表現(xiàn)出較好的酶活特性；冰袋+干冰運輸酶活不受影響。
FDA備案
生產流程嚴格參照ISO9001/GMP的標準，符合GMP生產標準
符合藥物IND申報要求
無動物源性、無抗生素：使用植物源性和化學合成原料發(fā)酵生產，發(fā)酵過程中不添加抗生素
全能核酸酶去除樣本核酸殘留后不免有引入全能核酸酶的影響，針對上述情況，Yeasen也提供了相應的檢測方案——UCF.ME® UltraNuclease Elisa Kit。該試劑盒應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測（夾心ELISA）原理檢測變性與非變性的UCF.ME® Ultra Nuclease全能核酸酶的殘留，用抗UCF.ME®Ultra Nuclease的兔多克隆抗體包被微孔板，形成固相抗體，向固相抗體微孔板中加入UCF.ME®Ultra Nuclease標準品和待測樣品，然后加入生物素（Biotin）標記的Anti-Ultra Nuclease多抗，最后加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素（SA-HRP），形成抗體+ 抗原+抗體-Biotin+SA-HRP復合物，經(jīng)過洗滌后加入TMB底物顯色；TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色并在酸的作用下最終轉換成黃色，顏色的深淺與樣品中UCF.ME®Ultra Nuclease的量呈正相關。本試劑盒檢測定量范圍0.047-3 ng/mL；檢測下限：23.5 pg/mL。
