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mRNA合成的關(guān)鍵步驟之一是將質(zhì)粒DNA進行線性化，這一步需要使用限制性內(nèi)切酶，IIs型內(nèi)切酶是質(zhì)粒線性化的內(nèi)切酶，因為它們在識別位點下游切割DNA，可確保所設(shè)計的poly(A)尾的完整性，線性化后的DNA模板上不會留下“疤痕"，IVT過程中也不會添加不需要的核苷酸。BsaI是常見的IIs型內(nèi)切酶之一，在mRNA合作中起著重要作用。
圖1. BsaI識別位點及切割序列
翌圣的BsaI由大腸桿菌重組表達，GMP標準生產(chǎn)，酶切效率高、星號活性低、末端完整性良好，可用于mRNA疫苗生產(chǎn)的質(zhì)粒線性化、慢病毒/腺病毒包裝的載體構(gòu)建、質(zhì)粒制備的酶切驗證、Golden Gate組裝等。
產(chǎn)品特點
嚴格按照GMP標準生產(chǎn)，確保無動物源成分引入。核酸酶，蛋白酶、宿主DNA/蛋白殘留、支原體、內(nèi)毒素等均嚴格質(zhì)控確保產(chǎn)品質(zhì)量。
具有高酶切效率，37℃反應(yīng)16 h無星號活性，經(jīng)酶切—連接—再酶切測試末端完整性良好。
將20 U BsaI與底物DNA在37℃孵育 1 h和16 h，瓊脂糖凝膠電泳比較DNA譜帶變化。結(jié)果顯示翌圣BsaI無非特異性核酸酶殘留。
圖2. 非特異性核酸酶殘留檢測結(jié)果
通過“酶切—連接—再酶切"的功能實驗驗證BsaI酶切的末端完整性，結(jié)果顯示翌圣的BsaI末端完整性良好，與進口品牌效果一致。
圖3. BsaI末端完整性檢測結(jié)果
在37℃下，將BsaI及底物DNA在酶切反應(yīng)體系中共同孵育16h，未檢測到星號活性引起的底物非特異性降解，表明翌圣BsaI 16 h孵育無星號活性。
圖4. BsaI星號活性檢測結(jié)果
