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精品推薦 | 從RNA到cDNA-翌圣5分鐘反轉(zhuǎn)錄系列產(chǎn)品快速出圈！
反轉(zhuǎn)錄是將RNA轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA (cDNA) 的過程，該反應(yīng)由反轉(zhuǎn)錄酶介導(dǎo)完成。在有退火引物的情況下，反轉(zhuǎn)錄酶首先與 RNA 模板結(jié)合。反轉(zhuǎn)酶的RNA依賴性 DNA 聚合酶活性通過摻入反應(yīng)混合物中的dNTP來合成cDNA，反應(yīng)生成得到 cDNA:RNA 雜合鏈，此過程被稱為第一鏈 cDNA 合成。
莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反轉(zhuǎn)錄酶是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)流程中常見的反轉(zhuǎn)錄酶之一。為了獲得更高的反轉(zhuǎn)錄效率、更好的熱穩(wěn)定性和更高的 cDNA 合成率，通常會(huì)對(duì)原始的反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行基因工程改造。目前市面上的反轉(zhuǎn)錄試劑所需要的反轉(zhuǎn)錄時(shí)間普遍從15分鐘到30分鐘不等，時(shí)間相對(duì)較長，當(dāng)反應(yīng)樣本量較大時(shí)，整體花費(fèi)時(shí)間量也會(huì)急劇上升。翌圣生物現(xiàn)有的5分鐘反轉(zhuǎn)錄系列產(chǎn)品，在5分鐘內(nèi)即可完成反轉(zhuǎn)錄，省時(shí)高效。
5分鐘一步消化&反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液(Cat #11151ES)
產(chǎn)品特點(diǎn)
一步完成：一步完成gDNA去除和反轉(zhuǎn)錄；
快速反應(yīng)：消化&反轉(zhuǎn)僅需5分鐘；
高效合成：可保證100 pg RNA反轉(zhuǎn)錄；
產(chǎn)物穩(wěn)定：cDNA產(chǎn)物可長久穩(wěn)定保存；
性能展示
圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板，分別檢測三種基因。品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。
圖. 以擬南芥RNA為模板，品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。
圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板，擴(kuò)增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分別投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄并進(jìn)行熒光定量檢測。結(jié)果顯示，11151ES可滿足100 pg-1 μg RNA的反轉(zhuǎn)錄。
圖.以人293T細(xì)胞RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得的cDNA產(chǎn)物進(jìn)行反復(fù)凍融，分別凍融10次、20次、30次。測試結(jié)果顯示11151ES反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA產(chǎn)物在30次反復(fù)凍融處理后，仍保持高度的穩(wěn)定性，Ct值差異不大。
圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得的cDNA產(chǎn)物在-20℃、4℃、25℃和37℃的溫度條件下放置7天。測試結(jié)果顯示11151ES反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA產(chǎn)物在不同溫度下存儲(chǔ)7天，仍保持高度的穩(wěn)定性，Ct值差異不大。
客戶用戶體驗(yàn)
樣本來源：人肝臟組織總RNA
樣本來源：胃黏膜細(xì)胞RNA
樣本來源：小鼠胰島素瘤細(xì)胞RNA
5分鐘快速反轉(zhuǎn)錄試劑盒(11149/11150ES)
產(chǎn)品特點(diǎn)
快速反轉(zhuǎn)：最快5分鐘左右即可完成第一鏈cDNA合成；
檢出率高：10 pg-1 ug的RNA檢出率；
高效合成：合成效率媲美進(jìn)口，最長可合成14kb大小的片段；
適用廣泛：可用于下游PCR或qPCR；
示蹤便利：示蹤版包含無干擾、可視化藍(lán)色示蹤染料，提醒加樣進(jìn)度。
性能展示
反轉(zhuǎn)錄時(shí)間 | 平均Ct值 |
5 min | 21.693 |
10 min | 21.589 |
15 min | 21.604 |
20 min | 21.746 |
25 min | 21.756 |
30 min | 21.691 |
圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，不同反轉(zhuǎn)錄時(shí)間處理的Ct值差值在0.2之內(nèi)。說明產(chǎn)品可在5分鐘內(nèi)完成反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)效果和長時(shí)間反轉(zhuǎn)效果持平。
靈敏度高，可至10 pg
圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，RNA 投入量為10 pg-1 μg時(shí)，11149ES均可反轉(zhuǎn)成功，保證定量結(jié)果。
圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將得到的cDNA進(jìn)行PCR檢測。結(jié)果顯示，11149ES能夠滿足合成1 kb-14 kb長度的cDNA, 后續(xù)PCR有一定的適用場景。若需要直接反轉(zhuǎn)出10kb以上的片段，建議延長反轉(zhuǎn)錄時(shí)間至20-30分鐘，以保證最終片段的獲取。
RNA投入量 | Ct值 | |
11149ES | 進(jìn)口A品牌 | |
1 μg | 15.2 | 15.5 |
100 ng | 18.0 | 18.5 |
10 ng | 21 | 21.7 |
1 ng | 24.5 | 25.1 |
100 pg | 29.1 | 29.7 |
10 pg | 32.7 | 34.3 |
圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES、進(jìn)口A品牌進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進(jìn)行g(shù)DNA去除步驟，將得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進(jìn)口A品牌反轉(zhuǎn)時(shí)間為13分鐘， 11149ES反轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘，不同產(chǎn)物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進(jìn)口競品，說明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進(jìn)口A品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。
RNA投入量 | Ct值 | |
11149ES | 進(jìn)口B品牌 | |
1 μg | 16.2 | 17.4 |
100 ng | 19.0 | 20.5 |
10 ng | 22 | 23.8 |
1 ng | 26 | 27.9 |
100 pg | 31.4 | 33.2 |
10 pg | 32.9 | 35.6 |
圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES、進(jìn)口B品牌進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進(jìn)行g(shù)DNA去除步驟，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進(jìn)口B品牌反轉(zhuǎn)時(shí)間為20分鐘，11149ES反轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘，不同量底物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進(jìn)口B品牌，說明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進(jìn)口B品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。
客戶體驗(yàn)反饋
樣本來源：菊花葉片
客戶評(píng)價(jià)：與某進(jìn)口品牌效果相似，擴(kuò)增常規(guī)大小的片段效果不錯(cuò)。
樣本來源：果*葉片
客戶評(píng)價(jià)：藍(lán)色很好看。
樣本來源：水稻
客戶評(píng)價(jià)：與其他反轉(zhuǎn)錄試劑盒相比，節(jié)省加樣時(shí)間，節(jié)省反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)間（其他試劑盒需要15+2 min，本試劑盒只需5 min），后續(xù)基因克隆DNA電泳結(jié)果證明，本試劑盒反轉(zhuǎn)效率更高，條帶更亮，所以會(huì)更節(jié)省PCR使用試劑，節(jié)省成本。
方法 | 分類 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
RNA提取 | 同Trizol提取 | TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent | 10606ES |
免氯仿升級(jí)版 | TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent(Tcm Free) | 19202ES | |
動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取，避開有毒試劑，最快15 min完成 | MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit細(xì)胞/組織總RNA提取試劑盒 | 19221ES | |
qPCR染料法 | 高靈敏通用型定量預(yù)混液(染料法) | Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Master Mix | 11184ES |
定量預(yù)混液 (染料法)，已發(fā)文章累計(jì)IF達(dá)到5000+ | Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) | 11201ES | |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox) | 11202ES | ||
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) | 11203ES | ||
反轉(zhuǎn)錄試劑 | 5 分鐘一步消化&反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液 | Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR | 11151ES |
5 分鐘快速反轉(zhuǎn)，最長可滿足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游應(yīng)用PCR/qPCR)-示蹤版 | Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit | 11149ES | |
5 分鐘快速反轉(zhuǎn)，最長可滿足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游應(yīng)用PCR/qPCR)-常規(guī)版 | Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit（No Dye） | 11150ES | |
鏈cDNA合成預(yù)混液，含gDNA去除(下游應(yīng)用qPCR) | Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES |
