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浙江大學(xué)周民/路靜團(tuán)隊(duì)在炎癥性腸?。↖BD)研究中創(chuàng)出新突破

2024-3-23  閱讀(224)

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研究背景

炎癥性腸?。↖BD)是一種腸道慢性炎癥性疾病,與普通人群相比,IBD患者表現(xiàn)出顯著的精神障礙患病率,可能常伴有焦慮和抑郁等。這些精神障礙可能與腸道和大腦之間的復(fù)雜溝通,即微生物群-腸-腦軸有關(guān),可能會(huì)使IBD患者特別容易患上精神疾病。雖然相關(guān)性的作用機(jī)制目前并不明確,但是有相關(guān)證據(jù)顯示IBD與抑郁或焦慮之間是存在相互作用的,并且也缺乏有效的治療方法來(lái)改善IBD及相關(guān)的精神障礙病癥。因此,研究IBD和精神合并癥的病因并開(kāi)發(fā)新的治療干預(yù)途徑具有重要的意義。

 

研究目的

為研究炎癥性腸?。↖BD)及其相關(guān)的抑郁和焦慮癥,浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院/浙江大學(xué)愛(ài)丁堡大學(xué)聯(lián)合學(xué)院/浙江大學(xué)鄂爾多斯鄂托克生物醫(yī)藥聯(lián)合研究中心周民教授,浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院路靜研究員,新加坡國(guó)立大學(xué)陳小元教授團(tuán)隊(duì)合作開(kāi)發(fā)了活性微藻口服藥物遞送系統(tǒng)用于胃腸道疾病治療及防護(hù),開(kāi)展微藻藥物的動(dòng)物模型藥理和毒理學(xué)系統(tǒng)研究,在推動(dòng)其臨床轉(zhuǎn)化上具有重大意義。該研究于2024年2月在國(guó)際學(xué)術(shù)期刊《Advanced Materials》(IF:29.4)上發(fā)表,論文標(biāo)題為“Microalgae-Based Hydrogel for Inflammatory Bowel Disease and Its Associated Anxiety and Depression"。(doi.org/10.1002/adma.202312275) 

文章提出了一種用于螺旋藻(Spirulina platensis,簡(jiǎn)稱SP)和大黃酸(rhein)共遞送的口服水凝膠策略(SP@Rh-gel),該水凝膠(SP@Rh-gel)可通過(guò)調(diào)節(jié)微生物群-腸-腦軸來(lái)治療IBD及其相關(guān)的精神障礙癥(焦慮和抑郁)。

 

 

研究要點(diǎn)

研究團(tuán)隊(duì)自組裝合成大黃酸水凝膠(Rh-gel),并通過(guò)添加螺旋藻制備了負(fù)載螺旋藻的大黃酸水凝膠(SP@Rh-gel),評(píng)價(jià)了SP@Rh-gel的物理化學(xué)性質(zhì),如狀態(tài)、溶解度、釋放特性和腸道滯留能力等,并在慢性結(jié)腸炎小鼠模型中,比較了SP@Rh-gel與對(duì)照組的治療,包括腸道炎癥、腸道微生物群落、腸道屏障、神經(jīng)炎癥、神經(jīng)可塑性和行為學(xué)的評(píng)估等。

 

1. SP@Rh-gel通過(guò)改善藥物溶解度、釋放特性和腸道滯留能力,提高其口服藥物生物利用度;

 

2. SP@Rh-gel可抑制NF-κB-caspase-1信號(hào)通路,減少腸炎并緩解腸道菌群紊亂,并重新平衡被破壞的腸道微生物群落,以維持腸道穩(wěn)態(tài);

 

3. SP@Rh-gel可維持腸道屏障完整性,減少促炎細(xì)胞因子和脂多糖LPS釋放,并阻止它們通過(guò)血腦屏障進(jìn)入海馬,從而抑制神經(jīng)炎癥并維持神經(jīng)可塑性;

 

4. SP@Rh-gel在慢性結(jié)腸炎小鼠模型中顯著減輕小鼠結(jié)腸炎癥狀以及焦慮和抑郁樣行為。

這項(xiàng)研究證明了微生物群-腸-腦軸在伴有精神疾病的IBD的發(fā)展中的重要作用,并提出了一種安全、簡(jiǎn)單、高效的治療方法來(lái)干預(yù)IBD及其伴發(fā)的精神障礙疾病。

 

圖1. SP@Rh-gel用于治療炎癥性腸病及伴發(fā)的焦慮和抑郁

 

 

研究創(chuàng)新點(diǎn)和意義

文章的創(chuàng)新點(diǎn)是,提出了一種基于微藻的水凝膠策略,用于共遞送螺旋藻和大黃酸,通過(guò)調(diào)節(jié)微生物群-腸-腦軸來(lái)治療IBD及其相關(guān)的焦慮和抑郁。這種策略不僅能夠有效改善口服藥物的溶解性、釋放特性和腸道滯留,還能夠同時(shí)緩解腸道和神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥,維持腸道和神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài),從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)IBD和精神障礙的干預(yù)。

 

 

研究方法

01

SP@Rh-gel的合成與表征

 
 

大黃酸是一種具有抗炎和抗氧化作用的天然化合物,可以用于治療IBD。首先將大黃酸溶解在碳酸氫鈉(NaHCO3)中,通過(guò)加熱和超聲處理,得到均一的溶液。然后,將溶液冷卻至室溫,形成Rh-gel。作者使用不同濃度的大黃酸(2, 3, 4, 6, 8 mg/mL),制備了五種Rh-gel,并分別命名為Rh-gel 1, Rh-gel 2, Rh-gel 3, Rh-gel 4和 Rh-gel 5。作者發(fā)現(xiàn),當(dāng)大黃酸的濃度達(dá)到或超過(guò)4 mg/mL時(shí),才能觀察到水凝膠的形成(見(jiàn)下圖2)。

 

圖2. 不同濃度的大黃酸形成的大黃酸水凝膠圖

 

研究發(fā)現(xiàn)隨著大黃酸濃度的增加,水凝膠的透明度降低,流變性減小,穩(wěn)定性增強(qiáng)。這意味著高濃度的大黃酸能夠形成更緊密和更堅(jiān)固的水凝膠,但也可能導(dǎo)致大黃酸的過(guò)量沉淀,影響水凝膠的均勻性和透光性。因此,研究團(tuán)隊(duì)選擇了6 mg/mL的大黃酸濃度作為最佳條件,以制備具有良好透明度、流變性和穩(wěn)定性的水凝膠。

 

SP@Rh-gel的UV-Vis光譜顯示了SP和Rh-gel的特征吸收峰,表明SP在水凝膠中保持了其結(jié)構(gòu)完整性。藥物釋放研究顯示,SP@Rh-gel在模擬腸道環(huán)境中實(shí)現(xiàn)了持續(xù)的大黃酸釋放,而在模擬胃環(huán)境中釋放較少,表明了其在腸道中的靶向釋放潛力。結(jié)果表明,SP@Rh-gel作為一種新型口服治療策略,能夠有效改善大黃酸的溶解性、釋放特性和腸道滯留,為治療IBD及其相關(guān)精神障礙提供了一種有前景的方法。

 

02

SP@Rh-gel的體外抗炎作用

 
 

研究SP@Rh-gel在大鼠小腸上皮細(xì)胞(IEC-6)中的體外抗炎作用。利用LPS誘導(dǎo)刺激IEC-6細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激發(fā)生,RT-PCR結(jié)果顯示LPS刺激細(xì)胞NF-κB和促炎細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)顯著增加,而SP@Rh-gel能有效抑制NF-κB和促炎細(xì)胞因子的上調(diào),同時(shí)LPS刺激導(dǎo)致IEC-6細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生(使用Yeasen的50101ES活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)),實(shí)驗(yàn)組表現(xiàn)出一定程度的ROS生成減少(見(jiàn)下圖3),顯示出SP@Rh-gel通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)途徑發(fā)揮抗炎作用。

 

圖3. ROS熒光圖(使用Yeasen的50101ES活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒

 

03

建立IBD小鼠模型,并評(píng)估其行為變化

 
 

慢性結(jié)腸炎(IBD)小鼠模型建立:利用葡聚糖硫酸鈉(DSS)(使用的Yeasen的60316ES結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽MW:36000~50000)誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎(IBD),給予小鼠三個(gè)周期的治療,每個(gè)周期包含1周的DSS給藥和2周的喂水,在第二和第三個(gè)喂水期間,小鼠接受PBS、Rh溶膠、Rh凝膠和SP@Rh-gel共14次給藥,每隔一天給藥一次。對(duì)照組在給藥期間接受相同劑量的PBS,并在整個(gè)期間不補(bǔ)充DSS飲用(見(jiàn)下圖4)。

 

評(píng)估不同組小鼠的行為學(xué)變化。結(jié)果表明,與DSS組相比,SP@Rh-gel治療組的小鼠在曠場(chǎng)測(cè)試(OFT)中表現(xiàn)出更多的中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間,在高架十字迷宮(EPM)測(cè)試中在開(kāi)放臂的停留時(shí)間和穿越頻率顯著增加,這反映了焦慮行為的減輕。在強(qiáng)迫游泳測(cè)試(FST)和尾部懸掛測(cè)試(TST)中,SP@Rh-gel組的小鼠的不動(dòng)時(shí)間顯著減少,這表明抑郁行為得到了緩解。DSS誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎會(huì)導(dǎo)致精神癥狀(如焦慮和抑郁),而SP@Rh-gel能有效緩解與慢性結(jié)腸炎相關(guān)的焦慮和抑郁樣行為。

 

圖4. 慢性結(jié)腸炎小鼠模型建立

圖5. SP@Rh-gel預(yù)防DSS誘導(dǎo)的焦慮和抑郁樣行為

 

04

SP@Rh-gel的神經(jīng)保護(hù)作用:神經(jīng)可塑性調(diào)控與成年海馬神經(jīng)發(fā)生

 
 

評(píng)估SP@Rh-gel的潛在抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用:根據(jù)行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)DSS誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎可能通過(guò)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥途徑引發(fā)神經(jīng)毒性,從而導(dǎo)致海馬炎癥和海馬神經(jīng)可塑性受損。結(jié)果顯示,DSS的給藥導(dǎo)致小鼠海馬齒狀回(DG)區(qū)域新形成的BrdU+/NeuN+標(biāo)記的神經(jīng)元和未成熟的DCX+標(biāo)記的神經(jīng)元的密度顯著降低。DSS組海馬DG和CA3區(qū)的Nissl陽(yáng)性活神經(jīng)元減少,用SP@Rh-gel成功地扭轉(zhuǎn)了這些減少,小膠質(zhì)細(xì)胞活化受到潛在抑制。

 

05

SP@Rh-gel對(duì)海馬炎癥的調(diào)節(jié)

 
 

通過(guò)使用RT-qPCR評(píng)估M1和M2小膠質(zhì)細(xì)胞中小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物的mRNA表達(dá)水平來(lái)評(píng)估SP@Rh-gel對(duì)海馬炎癥的影響。結(jié)果表明,SP@Rh-gel治療組 ,M1小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物:TNF-α、誘導(dǎo)型NOS(iNOS)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)的mRNA表達(dá)顯著降低;M2小膠質(zhì)細(xì)胞的常見(jiàn)標(biāo)志物:精氨酸-1(Arg-1)和CD28的mRNA表達(dá)顯著增加。SP@Rh-gel治療可以調(diào)節(jié)海馬體的炎癥反應(yīng)

 

06

SP@Rh-gel的抗腸道炎癥作用

 
 

SP@Rh-gel在DSS誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎中的抗炎作用:與DSS組相比,SP@Rh-gel治療組可以減緩體重減輕,緩解結(jié)腸炎的嚴(yán)重癥狀(如直腸出血和腹瀉)及其他相關(guān)癥狀,保持腸壁的完整性。

 

07

SP@Rh-gel對(duì)腸上皮屏障功能障礙的保護(hù)作用

 
 

SP@Rh-gel治療對(duì)于DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中腸上皮緊密連接蛋白的表達(dá)具有顯著影響。

•  Claudin-1、Occludin-1 和 ZO-1:在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎組中表達(dá)水平顯著降低,與對(duì)照組相比,表明腸道屏障功能嚴(yán)重受損。

•  Zonulin:在DSS組的血漿中觀察到上調(diào),Zonulin是調(diào)節(jié)內(nèi)皮和上皮細(xì)胞緊密連接的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑,能增加腸道的通透性。

•  SP@Rh-gel治療:顯著恢復(fù)了緊密連接蛋白的缺失,并降低了血漿中Zonulin的水平,表明其有潛力恢復(fù)腸道屏障的完整性。

 

08

SP@Rh-gel對(duì)腸道菌群和微生物代謝產(chǎn)物的調(diào)控

 
 

SP@Rh-gel治療對(duì)于調(diào)節(jié)腸道微生物群落的組成和緩解腸道微生態(tài)失調(diào)具有顯著作用。通過(guò)16S rDNA基因測(cè)序、Alpha多樣性指數(shù)、Beta多樣性PCoA分析、群落條形圖分析、群落熱圖分析、聚類分析、屬級(jí)微生物群落分析,結(jié)果顯示DSS組與對(duì)照組和SP@Rh-gel組之間的微生物組成有顯著差異。 

 

09

SP@Rh-gel對(duì)NF-κB通路激活的抑制作用

 
 

SP@Rh-gel能夠通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路的激活來(lái)抑制周圍和中樞的炎癥反應(yīng)。SP@Rh-gel顯著抑制了LPS誘導(dǎo)的NF-κB在RAW 264.7細(xì)胞和BV-2細(xì)胞中的轉(zhuǎn)移,顯著下調(diào)了RAW 264.7細(xì)胞和BV-2細(xì)胞中的促炎細(xì)胞因子,如TNF-α、IL-6和IL-1β,SP@Rh-gel抑制NF-κB信號(hào)通路的激活,從而抑制炎癥反應(yīng)。

 

10

SP@Rh-gel對(duì)神經(jīng)的保護(hù)作用:促進(jìn)神經(jīng)元和神經(jīng)突生長(zhǎng)

 
 

LPS刺激的BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞和PC-12細(xì)胞的共培養(yǎng)系統(tǒng)是研究SP@Rh-gel治療的神經(jīng)保護(hù)作用的有效體外研究模型,結(jié)果顯示SP@Rh-gel可以促進(jìn)神經(jīng)元增殖并增強(qiáng)神經(jīng)突生長(zhǎng),抵消LPS誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥損傷并支持神經(jīng)再生。

 

11

SP@Rh-gel的口服生物安全評(píng)價(jià)

 
 

雄性C57BL/6J小鼠每隔一天通過(guò)胃管注射300 μL的PBS、Rh-sol(4 mg/mL)、Rh-gel(4 mg/mL)和SP@Rh-gel(SP=2 mg/mL, Rh=4 mg/mL),持續(xù)一個(gè)月。治療后,收集小鼠的全血和血清樣本進(jìn)行血常規(guī)和生化分析,同時(shí)切除主要器官(大腦、心臟、肝臟、脾臟、肺、腎、胃和腸)進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)估。

 

結(jié)果顯示,SP@Rh-gel在體外具有良好的生物相容性和口服安全性,在口服給藥后不會(huì)對(duì)小鼠的主要器官造成顯著的組織病理學(xué)損傷,顯示出其潛在的臨床應(yīng)用安全性。

 

研究總結(jié)

文章探討了SP@Rh-gel水凝膠在治療DSS誘導(dǎo)的IBD小鼠模型中的胃腸功能障礙和合并的相關(guān)精神癥狀(抑郁和焦慮)中的有效性和機(jī)制。研究團(tuán)隊(duì)創(chuàng)造性的合成了SP@Rh-gel水凝膠,SP@Rh-gel口服給藥能夠調(diào)節(jié)炎癥途徑,改變腸道微生物的多樣性、組成和功能,從而通過(guò)腸道-微生物-大腦軸減輕DSS誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸炎癥狀以及類似焦慮和抑郁的行為。SP@Rh-gel治療能夠減輕周圍和中樞的炎癥反應(yīng),并通過(guò)維持腸道屏障完整性、抑制NF-κB-caspase-1信號(hào)通路以及調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞極化從M1向M2轉(zhuǎn)變,促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生。此外,SP@Rh-gel治療還能夠通過(guò)調(diào)節(jié)腸道微生物的多樣性和組成以及與炎癥、焦慮和抑郁相關(guān)的腸道微生物代謝物,恢復(fù)DSS誘導(dǎo)的腸道微生物失衡。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了腸道-微生物群-大腦相互作用在IBD患者焦慮和抑郁發(fā)生中的重要作用,并提出了一種有前景的治療方法干預(yù)IBD及其相關(guān)的精神并發(fā)癥,為臨床應(yīng)用提供了有價(jià)值的方案,并可能對(duì)胃腸道疾病和相關(guān)精神癥狀的治療產(chǎn)生重要影響。

 

翌圣助力產(chǎn)品

在該研究中,研究團(tuán)隊(duì)使用了翌圣生物Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS) 結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽MW:36000~50000(60316ES)進(jìn)行小鼠結(jié)腸炎造模:

 

 

使用Reactive Oxygen Species Assay Kit 活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒(DCFH-DA)(50101ES)進(jìn)行ROS活性氧檢測(cè):

 

DSS結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽MW:36000~50000發(fā)表文獻(xiàn)(不全統(tǒng)計(jì)):

[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Microalgae-Based Hydrogel for Inflammatory Bowel Disease and Its Associated Anxiety and Depression. Adv Mater. 2024 Jan 26: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Epub ahead of print. PMID: 38277492. (IF: 29.4)

[2] Li Zhao, et al. Improving drug utilization platform with injectable mucoadhesive hydrogel for treating ulcerative colitis. Chemical Engineering Journal. Volume 424, 2021, 130464. (IF: 13.27)

[3] Tong, L, et al. Milk-derived extracellular vesicles alleviate ulcerative colitis by regulating the gut immunity and reshaping the gut microbiota. Theranostics 2021, 11 (17), 8570-8586. DOI: 10.7150/thno.62046. (IF: 11.56)  

[4] Feng X, et al. Yeast Microcapsule Mediated Natural Products Delivery for Treating Ulcerative Colitis through Anti-Inflammatory and Regulation of Macrophage Polarization. ACS Appl Mater Interfaces. 2022 Jul 13;14(27):31085-31098. doi: 10.1021/acsami.2c05642. Epub 2022 Jun 30. PMID: 35770618. (IF: 10.38)  

[5] Li X, et al. Discoidin domain receptor 1(DDR1) promote intestinal barrier disruption in Ulcerative Colitis through tight junction proteins degradation and epithelium apoptosis. Pharmacol Res. 2022 Sep;183:106368. doi: 10.1016/j.phrs.2022.106368. Epub 2022 Jul 26. PMID: 35905891. (IF: 10.33)

[6] Jingjing Gan, et al. Orally administrated nucleotide-delivery particles from microfluidics for inflammatory bowel disease treatment. Applied Materials Today, Volume 25, 2021, 101231. (IF: 10.04)

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ROS活性氧檢測(cè)試劑盒發(fā)表文獻(xiàn)(不全統(tǒng)計(jì)):

[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Microalgae-Based Hydrogel for Inflammatory Bowel Disease and Its Associated Anxiety and Depression. Adv Mater. 2024 Jan 26: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Epub ahead of print. PMID: 38277492. (IF: 29.4)

[2] Zhang M, et al. Conscription of Immune Cells by Light-Activatable Silencing NK-Derived Exosome (LASNEO) for Synergetic Tumor Eradication. Adv Sci (Weinh). 2022 Aug;9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 Jun 4. (IF: 16.806)

[3] Zhang D, et al. Microalgae-based oral microcarriers for gut microbiota homeostasis and intestinal protection in cancer radiotherapy. Nat Commun. 2022 Mar 17;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. (IF: 14.919)

[4] Jiao D, et al. Biocompatible reduced graphene oxide stimulated BMSCs induce acceleration of bone remodeling and orthodontic tooth movement through promotion on osteoclastogenesis and angiogenesis. Bioact Mater. 2022 Feb 6; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. (IF: 14.593)

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產(chǎn)品推薦

 

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)

價(jià)格(元)

促價(jià)(元)

Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS)

結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽 MW:36000~50000

60316ES25

25 g

1,255

1,058

60316ES60

100 g

3,855

2,928

60316ES76

500 g

16,855

10,628

60316ES80

1 kg

32,855

20,528

Reactive Oxygen Species Assay Kit 活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒

50101ES01

1000 T

965.00

878.00



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