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核酸電泳是分子生物學(xué)研究中的一項(xiàng)基本技術(shù)，廣泛應(yīng)用于基因克隆、DNA指紋分析、RNA表達(dá)研究等領(lǐng)域。這項(xiàng)技術(shù)的核心在于利用電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)DNA或RNA分子通過(guò)凝膠基質(zhì)，實(shí)現(xiàn)不同大小分子的分離。盡管核酸電泳的原理相對(duì)簡(jiǎn)單，但其往往影響最終的成果展示。所以在實(shí)際操作過(guò)程中，如何提高電泳效率、獲得更清晰的條帶一直是研究人員追求的目標(biāo)。小翌將分享一些實(shí)用的實(shí)驗(yàn)室小竅門(mén)，以幫助各位科研小伙伴們提高電泳效率~
電泳槽
選擇合適的凝膠濃度和電泳緩沖液
凝膠濃度對(duì)電泳分離效率有著直接影響。瓊脂糖是常用的凝膠材料，其濃度通常在0.7%至2%之間選擇。濃度越高，凝膠的分子孔徑越小，DNA遷移速率越慢，但分辨率越高。反之，濃度越低，DNA遷移速率越快，但分辨率較低。電泳緩沖液的組成對(duì)DNA的遷移速度和分離效率同樣重要。因此，針對(duì)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，選擇合適的凝膠濃度與適配的電泳緩沖液。
瓊脂糖濃度 | 有效分離范圍（bp） | 推薦緩沖液 |
0.5% | 2,000-50,000 | 1×TAE |
0.8% | 800-10,000 | 1×TAE |
1.0% | 400-8,000 | 1×TAE |
1.2% | 300-7,000 | 1×TAE |
1.5% | 200-3,000 | 1×TAE/0.5×TBE |
2.0% | 100-2,000 | 1×TAE/0.5×TBE |
3.0% | 25-1,000 | 0.5×TBE |
TAE緩沖液
TAE緩沖液含有乙酸（Acetic acid）、EDTA和Tris，適合用于快速電泳和大片段DNA的分離。乙酸的存在降低了凝膠的pH值，有助于提高電泳速度。
TBE緩沖液
TBE緩沖液含有硼酸（Boric acid）、EDTA和Tris，其離子強(qiáng)度較高，適合用于小片段DNA的高分辨率分離。硼酸根離子的存在增強(qiáng)了凝膠的穩(wěn)定性，有助于提高分離效率。因此凝膠濃度越大，需采用TEB緩沖液，便于分離條帶。
小翌有多種瓊脂糖，適合不同的應(yīng)用場(chǎng)景，供大家選擇~
樣品準(zhǔn)備
DNA純化
確保DNA樣品的純度，避免蛋白質(zhì)、多糖和其它雜質(zhì)的污染，這可以通過(guò)適當(dāng)?shù)募兓襟E實(shí)現(xiàn)。純化的DNA樣品能夠提供清晰的電泳條帶，減少背景干擾。
DNA Marker
選擇背景干凈、帶型穩(wěn)定、大小精準(zhǔn)的DNA Marker，如翌圣GoldBand系列DNA Marker（Cat#10501ES-10518ES）。
均勻加樣
加樣技巧
使用加樣器時(shí)保持平穩(wěn)，右手執(zhí)移液槍?zhuān)笫址鲈谝埔簶屒胺郊?xì)柄處，斜角45℃懸空插入點(diǎn)樣孔中2-3 mm處點(diǎn)樣。盡量避免戳破凝膠，避免樣品接觸凝膠表面，減少樣品擴(kuò)散。均勻的加樣能夠確保DNA片段在凝膠中的一致遷移，避免條帶扭曲或模糊。
加樣量
控制適當(dāng)?shù)募訕恿?，過(guò)量的樣品會(huì)導(dǎo)致條帶模糊。適量的加樣能夠保證條帶的清晰度和可讀性，其上樣量與核酸電泳制膠時(shí)的梳子大小相關(guān)。
梳子厚度（mm） | 梳子孔寬（mm） | 每孔最大上樣量（μL） | 推薦上樣量（μL） |
1.0 | ~3 | ~15 | 5-10 |
1.5 | ~4.2 | ~25 | 10-15 |
1.5 | ~7 | ~50 | 20-40 |
2.0 | ~1.5 | ~200 | 80-150 |
電泳條件
電壓控制
根據(jù)凝膠長(zhǎng)度和厚度調(diào)整電壓，過(guò)高的電壓會(huì)導(dǎo)致熱量積累，影響DNA的遷移。適宜的電壓設(shè)置有助于保持恒定的電泳速度，避免條帶扭曲。
恒壓電泳
優(yōu)先選擇恒壓電泳而非恒流電泳，以保持電場(chǎng)強(qiáng)度的穩(wěn)定。恒壓電泳能夠減少電泳過(guò)程中的熱效應(yīng)，提高分離效率。但需注意電壓控制在110-130v為佳，過(guò)高電壓易造成不穩(wěn)定脈沖，影響電泳效果。
電壓過(guò)高造成的條帶模糊
預(yù)電泳
如果是新鮮配制的緩沖液，在加樣前進(jìn)行預(yù)電泳，可以清除凝膠中的雜質(zhì)和氣泡，平衡凝膠孔隙中的離子濃度，減少樣品遷移過(guò)程中的阻力，提高電泳效率。預(yù)電泳時(shí)間一般建議5-10分鐘。
使用新鮮凝膠
避免重復(fù)使用
重復(fù)使用的凝膠可能會(huì)因緩沖液的滲入而改變孔隙大小，影響分離效果。新鮮凝膠能夠提供一致的孔隙率，保證電泳結(jié)果的可重復(fù)性。
核酸染料的選擇
安全染料
使用YeaRed（Cat#10202ES）或YeaGreen（Cat#10204ES）無(wú)毒核酸染料，避免使用EB等有毒染料，減少紫外光暴露風(fēng)險(xiǎn)。安全染料不僅對(duì)操作人員更安全，而且對(duì)環(huán)境的影響更小。
小翌希望通過(guò)上述小竅門(mén)的實(shí)施，可以幫助大家顯著提高核酸電泳的分離效率和結(jié)果的清晰度，進(jìn)一步提高實(shí)驗(yàn)的效率和安全性~
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
YeaRed 核酸染料（10,000×水溶液） | 10202ES76 | 500 μL |
YeaGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water) 核酸染料 | 10204ES76 | 500 μL |
Agarose瓊脂糖 | 10208ES60/76 | 100 g/500 g |
GoldBand DL2,000 DNA Marker | 10501ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand DL600 DNA Marker | 10502ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand DL5,000 DNA Marker | 10504ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand DL10000 DNA Marker | 10505ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 100 bp DNA ladder | 10507ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 1 kb DNA ladder | 10510ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand Full-Scale DNA Ladder | 10511ES80 | 1 mL |
GoldBand 15000 DNA Marker | 10512ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 50bp DNA Ladder | 10515ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 100bp plus DNA Ladder | 10516ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 200 bp DNA Ladder | 10517ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 500 bp DNA Ladder | 10518ES60/80 | 100 T/10×100 T |
