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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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基本原理
DNA與磷酸鈣的結(jié)合
在含有磷酸鹽的緩沖液（HBS）中，加入氯化鈣（CaCl2）溶液和含有目的DNA的溶液。
DNA分子在生理pH條件下帶負(fù)電荷，而磷酸鈣帶正電荷，通過靜電作用，DNA與磷酸鈣結(jié)合。
形成DNA-磷酸鈣共沉淀物
細(xì)胞吸收共沉淀物
DNA進(jìn)入細(xì)胞
DNA的表達(dá)
翌圣生物的磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，基于傳統(tǒng)方法優(yōu)化，提高轉(zhuǎn)染效率，減少細(xì)胞毒性，特別適合HEK293、293T和Hela等細(xì)胞系。適用于瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，即開即用，操作簡便。
產(chǎn)品特點(diǎn)
性能穩(wěn)定：可在2-8℃保存，有效期2年；
轉(zhuǎn)染效率高：在293T細(xì)胞上陽性率高達(dá)95%；
毒性低：對細(xì)胞基本無毒，轉(zhuǎn)染后不影響細(xì)胞正常生長。
結(jié)果展示
6孔板中，使用翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒， 按照轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行操作；轉(zhuǎn)染48 h后，熒光倒置顯微鏡下觀察并拍照。結(jié)果顯示，翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染效率高達(dá)95%以上。
293T細(xì)胞（6孔板）
操作方法
按照60％左右的密度種植細(xì)胞入培養(yǎng)皿（瓶），細(xì)胞貼壁生長12-24小時(shí)后即可準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染；
準(zhǔn)備1.5 mL離心管，按照下表指示，依次加入DNA、HBS和CaCl2；
吹打3－5 次后均勻加到待轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)液中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿（瓶）；
不同培養(yǎng)容器試劑使用量（僅供參考）
細(xì)胞培養(yǎng)試劑 | 6孔板 | T-25培養(yǎng)瓶 | 10 cm平皿 |
培養(yǎng)基（mL） | 2 | 5 | 10 |
DNA（μg） | 2 | 4 | 7.5 |
HBS（mL） | 0.2 | 0.5 | 1 |
CaCl2（μL） | 14 | 35 | 70 |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
Hieff Trans®Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑 | 200T | 40803ES70 |
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Hieff Trans® Ultra PEI-AAV Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑 | 1 mL /10 mL /100mL | 40823ES03/40823ES10 /40823ES60 |
