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細胞核染色 - DAPI染色液

2024-11-22  閱讀(344)

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產品介紹

DAPI,也稱DAPI dihydrochloride,是一種常用的核酸染料,和EB(ethidium bromide)相比,DAPI對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。盡管DAPI不能通過活細胞膜,但可以通過提高濃度使之進入活細胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用來檢測酵母線粒體DNA,葉綠體DNA,病毒DNA,Microplasm DNA以及染色體DNA。

 

技術原理

DAPI可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結合,產生比自身強20多倍的藍色熒光。DAPI也可對RNA進行染色,染色機理是其可以選擇性嵌入“AU序列"并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA(Ex/Em=358 nm/461 nm),DAPI-RNA具有較長的最大發(fā)射波長(500 nm),其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。

 

運輸與保存方法

冰袋運輸,5 mg/mL的DAPI儲存液于-20oC避光保存,1年有效。

 

使用方法

1、用雙蒸水或PBS稀釋母液,配制成所需要的工作的濃度(0.5-10 μg/mL)。

2、對于固定的細胞或組織樣品,固定后,適當洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進行。如果不需要進行其它染色,則直接進行DAPI 染色。

3、細胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液,約1/10細胞培養(yǎng)基體積,必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1 mL染色液,對于96孔板一個孔需加入100 μL染色液。 

4、在37℃培養(yǎng)細胞 10~20 分鐘。

5、用 PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

6、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm,發(fā)射波長460 nm。

 

不同DAPI染色的結果

 

注意事項

1)DAPI對人體有一定刺激性,請注意適當防護。

2)熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當天完成檢測。

3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4)低濃度的DAPI不容易穿透細胞膜。

 

相關產品

產品名稱

產品貨號

規(guī)格

DAPI染液(5mg/ml)

40728ES03

1mg (200μl)

DAPI 4’,6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚

40727ES10

10mg

Propidium iodide Staining Solution1mg/ml)碘化丙啶染液(1mg/ml)

40710ES03

1ml

PI (Propidium iodide) 碘化丙啶

40711ES10/60

10mg/100mg

7-AAD 7-氨基放線菌素D

40722ES03

1 mg

Trypan Blue臺盼藍

40724ES10

10 g


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