已知，凡是能造成生物機(jī)體體溫上升的物質(zhì)均可稱為熱原（Pyrogen），其來(lái)源可能多樣化。而細(xì)菌內(nèi)毒素（Endotoxin）是熱原的一種，它是細(xì)菌性感染的一個(gè)重要致病因素。

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌菌體中存在的毒性物質(zhì)總稱，為多種革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的teyou結(jié)構(gòu)。細(xì)菌內(nèi)毒素主要由磷脂、脂蛋白和脂多糖（LPS）組成，其中脂多糖（LPS）是天然或?qū)嶒?yàn)室制備的內(nèi)毒素復(fù)合物的生物活性部分，發(fā)揮毒性作用的是類脂質(zhì)A（Lipid A）。不同革蘭氏陰性菌的脂質(zhì)A結(jié)構(gòu)基本相似，所以由此類細(xì)菌引起的感染導(dǎo)致的毒性效應(yīng)大致相同，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。細(xì)菌在存活狀態(tài)時(shí)不會(huì)釋放內(nèi)毒素，但當(dāng)細(xì)菌死亡裂解或者自溶后，內(nèi)毒素會(huì)被大量釋放出來(lái)。

圖1.革蘭氏陰性菌結(jié)構(gòu)圖

細(xì)菌內(nèi)毒素耐熱性和化學(xué)穩(wěn)定性很強(qiáng)，一般的方法很難將其去除或滅活，如：常規(guī)高壓滅菌法也不能將內(nèi)毒素chedi清除，一般的化學(xué)藥品也不會(huì)影響細(xì)菌內(nèi)毒素的活性，只有強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或強(qiáng)氧化劑可以破壞其結(jié)構(gòu)。但內(nèi)毒素具有水溶性，生產(chǎn)中可用無(wú)熱原水沖洗以除去熱原；其還具有被吸附性，可用活性碳將其吸附。

細(xì)菌內(nèi)毒素是目前最危險(xiǎn)和最常見(jiàn)的致熱污染物之一，主要原因?yàn)椋核谧匀唤缰袩o(wú)處不在（革蘭氏陰性菌即使在干凈的水中也能繁殖）、毒性強(qiáng)、在jiduan條件下也很穩(wěn)定、生產(chǎn)過(guò)程中很容易引入。對(duì)于日常的生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)，使用細(xì)菌制備的質(zhì)粒DNA和重組蛋白中都會(huì)有內(nèi)毒素的殘留，而且很難去除干凈，進(jìn)而對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)潛在毒性影響。內(nèi)毒素的主要成分脂多糖有強(qiáng)烈的免疫活性和細(xì)胞毒性并產(chǎn)生復(fù)雜的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)，因此大多數(shù)情況下會(huì)明顯干擾并產(chǎn)生不可預(yù)測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)生物系統(tǒng)，當(dāng)人（或動(dòng)物）體血液系統(tǒng)的輸入液中混入微量的細(xì)菌內(nèi)毒素時(shí)，可激活組織內(nèi)的炎性細(xì)胞和炎癥因子，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱并產(chǎn)生全身性炎癥反應(yīng)，在很短時(shí)間內(nèi)將會(huì)使人產(chǎn)生昏迷和高燒，若不及時(shí)搶救，很可能危及生命。

因此，無(wú)論是用于生命科學(xué)研究的可能含有內(nèi)毒素的相關(guān)試劑，還是用于人和動(dòng)物預(yù)防或治療的化學(xué)藥品、抗生素、生物制品等的原輔料、中間品和放行產(chǎn)品均需要進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)，以確保有效性和安全性。

從20世紀(jì)開始，內(nèi)毒素檢測(cè)方法相繼出現(xiàn)。

鑒于上述情況，國(guó)內(nèi)外藥典法規(guī)也提出了一些新的內(nèi)毒素檢測(cè)方法。如：2020版《中國(guó)藥典》（四部）9251章節(jié)中提到可以采用重組C因子法檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素（C因子是鱟試劑中對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素敏感的蛋白，能夠選擇性識(shí)別內(nèi)毒素）。美國(guó)藥典(USP)專家委員會(huì)也已于2024年7月26日批準(zhǔn)將USP<86>Bacterial Endotoxins Test Using Recombinant Reagents納入《美國(guó)藥典-國(guó)家處方集》，USP<86>章節(jié)于2024年11月發(fā)布，并于2025年5月正式生效。重組C因子法(rFc)通過(guò)重組方法產(chǎn)生C因子，具有：C因子來(lái)源穩(wěn)定，受批次影響?。徊僮骱?jiǎn)單快速；更強(qiáng)的抗干擾能力（不受β-glucans影響）；專屬性好等優(yōu)點(diǎn)。該方法也有其缺點(diǎn)，主要為來(lái)源于不同品質(zhì)鱟血蛋白序列的重組蛋白對(duì)內(nèi)毒素的反應(yīng)性可能不同。

圖2.中外法規(guī)里列舉的內(nèi)毒素檢測(cè)方法

2020版《中國(guó)藥典》（三部）針對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)，收錄了包括凝膠法和光度法在內(nèi)的共6種細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。

凝膠法和光度法等都需要從海洋節(jié)肢動(dòng)物鱟中取鱟血作為原料，而鱟目前已呈瀕危現(xiàn)狀，亟需尋求替代方法。2020版《中國(guó)藥典》（四部）9251章節(jié)中提到可以采用重組C因子法檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素。此外，美國(guó)、歐洲和日本藥典也都提到可以采用重組C因子法檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素。

表1.各種內(nèi)毒素檢測(cè)方法介紹

目前，行業(yè)內(nèi)對(duì)于內(nèi)毒素的檢測(cè)，雖然仍以鱟試劑方法為主，但也逐漸接受重組C因子的檢測(cè)方法。為此，翌圣生物自主研發(fā)了重組C因子內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒。

本試劑盒通過(guò)基因重組的方式表達(dá)C因子，然后重組C因子被待測(cè)樣本中的細(xì)菌內(nèi)毒素激活，進(jìn)而酶切水解熒光底物，產(chǎn)生與內(nèi)毒素濃度成比例的熒光信號(hào)，根據(jù)熒光信號(hào)值檢測(cè)內(nèi)毒素含量。本試劑盒可以用于人類疾病治療的注射藥物（如化學(xué)藥品、抗生素、生物制品等）和醫(yī)療器械（包括透析液、植入式器械等）的原輔料、研發(fā)和生產(chǎn)工藝過(guò)程以及商業(yè)化進(jìn)程中的內(nèi)毒素檢測(cè)。

試劑盒檢測(cè)范圍為0.005~5EU/mL，R2=0.9968，各濃度檢測(cè)值CV≤10%。

圖3.重組C因子內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線

該重組C因子內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒不受鱟試劑中β葡聚糖的干擾，避免了因β-葡聚糖引起的假陽(yáng)性/結(jié)果不準(zhǔn)確情況。

表2.不同內(nèi)毒素檢測(cè)方法數(shù)據(jù)對(duì)比