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隨著基因編輯技術(shù)的飛速發(fā)展，CRISPR-Cas9、TALEN、ZFN等工具已成為生命科學(xué)領(lǐng)域的核心利器。然而，基因編輯的成功與否，關(guān)鍵在于編輯效率的準(zhǔn)確評(píng)估。如何快速、高效地檢測(cè)基因編輯的效率，成為了科研人員面臨的重要挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法如測(cè)序等雖然準(zhǔn)確，但耗時(shí)長(zhǎng)、成本高，難以滿足高通量篩選的需求。因此，開發(fā)一種快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法成為了當(dāng)務(wù)之急。在這一背景下，T7核酸內(nèi)切酶 I（T7 Endonuclease I）憑借其高靈敏度、快速反應(yīng)和操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，成為評(píng)估CRISPR-Cas9等基因編輯工具效率的理想選擇。
T7 Endonuclease I是一種來源于T7噬菌體的核酸酶，能夠識(shí)別并切割不全配對(duì)的DNA、十字形結(jié)構(gòu)DNA、Holliday結(jié)構(gòu)或交叉DNA、異源雙鏈DNA，也能以較慢速度切割帶切刻的雙鏈DNA，切割位點(diǎn)位于錯(cuò)配堿基5′端的第一、第二或第三個(gè)磷酸二酯鍵。其應(yīng)用于基因編輯效率檢測(cè)的作用機(jī)制如下：當(dāng)基因編輯后，目標(biāo)位點(diǎn)會(huì)形成含有錯(cuò)配堿基的DNA雙鏈（如插入、缺失或點(diǎn)突變），T7 Endonuclease I能夠識(shí)別這些錯(cuò)配位點(diǎn)，并在其附近進(jìn)行切割，產(chǎn)生特定長(zhǎng)度的DNA片段。
圖1.T7 Endonuclease I結(jié)構(gòu)及作用過程示意圖[1]
基于T7 Endonuclease I在基因編輯效率檢測(cè)中的的重要地位，翌圣生物隆重推出純度高、切割活性強(qiáng)的T7 Endonuclease I (Cat#14548)，為您的基因編輯研究提供更高效、更穩(wěn)定的工具。
性能展示
T7 Endonuclease I (Cat#14548)
切割活性強(qiáng)
使用翌圣和來自進(jìn)口Supplier A*的T7 Endonuclease I分別與含有錯(cuò)配堿基的dsDNA底物進(jìn)行孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翌圣20 U的T7 Endonuclease I能有效切割200 ng含有錯(cuò)配堿基的dsDNA，且切割效果媲美來自進(jìn)口Supplier A*的T7 Endonuclease I。
圖2.T7 Endonuclease I切割效果驗(yàn)證（注：底物投入量-200ng）
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活動(dòng)細(xì)則：
1、活動(dòng)時(shí)間：2025年4月8日-2025年4月30日；
2、活動(dòng)名額有限，每位客戶限一套。
基因編輯相關(guān)產(chǎn)品展示
產(chǎn)品應(yīng)用 | 產(chǎn)品定位 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
通用型 | 帶NLS的SpCas9 | Cas9 Nuclease | 14701ES |
熒光觀察/流式分選 | 帶EGFP熒光標(biāo)簽的SpCas9 | NLS-Cas9-EGFP Nuclease | 11364ES |
基因調(diào)控 | 無剪切酶活性的Cas9 | dCas9 Nuclease | 11351ES |
小分子量遞送 | Cas12a | ArCas12a Nuclease | 14702ES |
Cas12b | AapCas12b Nuclease | 14808ES | |
sgRNA制備 | sgRNA合成 | Hifair® Precision sgRNA Synthesis Kit | 11355ES |
sgRNA純化 | Hieff NGS® RNA Cleaner | 12602ES | |
編輯效率檢測(cè) | 編輯效率檢測(cè) | T7 Endonuclease I | 14548ES |
參考文獻(xiàn)
[1] Déclais A C, Hadden J, Phillips S E V, et al. The active site of the junction-resolving enzyme T7 endonuclease I[J]. Journal of molecular biology, 2001, 307(4): 1145-1158.
[2] Babon J J , Mckenzie M , Cotton R G H .The Use of Resolvases T4 Endonuclease VII and T7 Endonuclease I in Mutation Detection[J].Molecular Biotechnology, 2003, 23(1):73-81.DOI:10.1385/MB:23:1:73.
[3] Kazuki M , Shouta U , Junpei Y ,et al.Structure-specific DNA endonuclease T7 endonuclease I cleaves DNA containing UV-induced DNA lesions[J].The Journal of Biochemistry, 2024(1):1.DOI:10.1093/jb/mvae024.
