——純度>90%，酶活>250U/μL，無(wú)內(nèi)毒素，無(wú)標(biāo)簽

1. 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

核酸酶，又稱廣譜核酸酶，英文名稱Benzonase Nuclease，一種來(lái)源于Serratia Marcescen的基因工程酶。它可以降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然以及變性的核酸，將它們消化成3-8個(gè)堿基長(zhǎng)度的5-單磷酸寡核苷酸，且不具有堿基識(shí)別特異性。另外，核酸酶在非常廣泛的條件下（6M urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）都能保持很高的穩(wěn)定性和消化活力，非常適用于作為各類科學(xué)研究以及疫苗、蛋白、多糖類制藥工業(yè)的酶制劑，去除樣本或制品中的核酸殘留，提升樣本純度和制品生物功效。

圖1  核酸酶結(jié)構(gòu)圖

2. 產(chǎn)品應(yīng)用

1）用于除去生物制品中的DNA/RNA

美國(guó)FDA對(duì)治療用每劑量的生物制品的核酸含量要求為低于10 pg，國(guó)內(nèi)對(duì)此相應(yīng)的要求為低于100 pg。核酸酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工業(yè)生物制品中核酸的去除，使生物制品的zui終核酸含量符合要求，同時(shí)提高生物制品功效。

 2）用于降低細(xì)胞破碎后的粘度

核酸酶可以降解所有形式的核酸，降低細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分離效果，使之易于過(guò)濾（尤其是超濾），利于下游層析純化操作。

圖2  細(xì)胞裂解液Benonase處理（A）和未處理（B）比較圖

3）用于細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)源產(chǎn)物的純化過(guò)程

核酸很容易粘附在病毒樣顆粒（VLP）、病毒粒子、包涵體等細(xì)胞生成顆粒的表面，使顆粒大小或電荷發(fā)生改變，造成這些顆粒的聚集，如外周血單細(xì)胞（PBMC）存放過(guò)程中的結(jié)塊現(xiàn)象。核酸酶可有效降解核酸，避免核酸對(duì)細(xì)胞產(chǎn)物的影響以及純化效率，利于提高細(xì)胞產(chǎn)物純化效率。

4）用于生化分析樣品的制備

在ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過(guò)程中，用核酸酶處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，并提高回收率。

圖3  小鼠腦核蛋白Benonase處理（A）和未處理（B）雙向電泳比較圖

3. 產(chǎn)品性質(zhì)

表1  產(chǎn)品性質(zhì)表

4. 產(chǎn)品使用

1）產(chǎn)品作用條件

核酸酶在非常廣泛的條件下，都能保持很高的穩(wěn)定性和消化活力。表1中列舉了核酸酶可發(fā)揮核酸消化作用的部分條件參數(shù)。除此之外，核酸酶還可耐受6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF，0.4% Sodium deoxycholate。

表2 核酸酶作用條件

注：1）zui適條件為核酸酶釋放≥90%活力的條件，可作用條件為核酸酶釋放≥15%活力的條件；2）核酸酶活力定義為在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A₂₆₀吸收值變化1.0（相當(dāng)于*消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。

2）產(chǎn)品酶活測(cè)定

一個(gè)酶活性單位（U）定義為：在37°C、pH 8.0的反應(yīng)條件下，30分鐘內(nèi)可將37 µg的底物DNA（鮭魚精DNA）消化成為寡核苷酸（相當(dāng)于使260 nm吸收值變化1.0）的Binuclease核酸酶的量。

根據(jù)測(cè)試，本產(chǎn)品酶活≥250 U/μL，比活≥1.0×10⁶ U/mg蛋白。

3）產(chǎn)品運(yùn)輸、儲(chǔ)存及穩(wěn)定性

固體酶可室溫運(yùn)輸，建議儲(chǔ)存溫度低于4°C。液體酶宜冷藏運(yùn)輸，建議－20°C保存。

液體酶在-20°C條件下，有效期為1年。打開(kāi)包裝使用后，如果在2-8°C環(huán)境下放置超過(guò)一周時(shí)間，建議過(guò)濾除菌，防止微生物污染。固體酶儲(chǔ)存有效期為3年，打開(kāi)包裝后及時(shí)使用，避免受潮。

5. 價(jià)格對(duì)比

Yeasen致力于為您提供的產(chǎn)品。

圖4  Yeasen核酸酶價(jià)格優(yōu)勢(shì)（25 KU規(guī)格）

6. 文獻(xiàn)引用

[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.

[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.

[3] Kulkarni P S, Sahai A, Gunale B, et al. Development of a new purified vero cell rabies vaccine (Rabivax-S) at the serum institute of India Pvt Ltd[J]. Expert Review of Vaccines, 2017, 16(4): 303-311.

[4] Rai T S, Adams P D. Chapter Fourteen-ChIP-Sequencing to Map the Epigenome of Senescent Cells Using Benzonase Endonuclease[J]. Methods in enzymology, 2016, 574: 355-364.

[5] Yang Z, Li M, Chen W, et al. The smart solution for DNA removal in biopharmaceutical production by benzonase endonuclease[J]. Journal of Applied Virology, 2013, 2(1).

7. 常見(jiàn)問(wèn)答

Q. 產(chǎn)品應(yīng)如何稀釋？

A：正常建議稀釋比例(終濃度)為1:1000-1:20000，其中時(shí)間、溫度、稀釋比例為影響反應(yīng)的正面因素。

Q. 產(chǎn)品能否可以減少用量？

A：如希望減少用量，可酌情提高反應(yīng)溫度或延長(zhǎng)時(shí)間。

Q. 使用該產(chǎn)品進(jìn)行消化反應(yīng)的抑制因子有哪些？

A：在含有以下物質(zhì)的體系中，核酸酶的活性會(huì)降低50%或以上：>150 mM一價(jià)陽(yáng)離子，>100 mM磷酸鹽，>100 mM硫酸銨，>100 mM鹽酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。

Q. 怎樣滅活核酸酶？如何去除？

A：采用EDTA螯合金屬離子會(huì)可逆地抑制核酸酶活性，條件會(huì)造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等。核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產(chǎn)物中分離出去。

Q. 核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容？

A：核酸酶與不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物兼容。若含有EDTA且濃度>1 mM時(shí)，會(huì)抑制核酸酶活性，建議：如果必須加EDTA，按照2倍EDTA濃度補(bǔ)加Mg²⁺。

Q. 產(chǎn)品的用量是多少？

A：需要根據(jù)重懸菌體所需裂解液的體積來(lái)確定需要酶的量。若普通蛋白純化，則需要濃度為25 U/mL；核蛋白則需要100 U/mL；病毒表達(dá)蛋白純化需要濃度為12.5 U/mL；疫苗產(chǎn)品需要量為0.9-1.1 U/mL。

Q. 產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何，如果不小心在室溫放置幾天后，酶活性會(huì)受到怎樣的影響？

A：室溫2-3天，對(duì)活力影響不大。

Q. 核酸酶能在尿素環(huán)境消化核酸嗎？

A：核酸酶在尿素濃度為6 M時(shí)活性先增加，隨著時(shí)間延長(zhǎng)活性又有降低；在尿素為7 M時(shí)，核酸酶15分鐘后出現(xiàn)變性并失活。但是在酶失活前多數(shù)核酸已經(jīng)降解了。可通過(guò)提高核酸酶使用濃度補(bǔ)償7 M尿素的影響。

8. 訂購(gòu)信息

9. 相關(guān)產(chǎn)品推薦

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