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背 景：
活體成像技術(shù)（optical in vivo imaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù)，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內(nèi)，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng)，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測光強度，間接反映出細胞數(shù)量的變化或細胞的定位。這項技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域，zui常用的有腫瘤或疾病動物模型的建立，并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等。
原 理：
常見的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲熒光素酶（firefly luciferase，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase，編碼基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長不同），當?shù)孜镞^量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。
Coelenterazine腔腸熒光素
美國YEASEN提供三種coelenterazine類似物，分別是Coelenterazine，Coelenterazineh，Coelenterazine 400a。雖然三種都可用于相同實驗，但是得到的結(jié)果有差異。
Coelenterazine：普遍認為是天然的腔腸熒光素，是海腎熒光素酶（Rluc）的作用底物，具有許多用途。可用于檢測活細胞中鈣離子濃度，基因報告分析，BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA，HTS，組織或細胞中超氧陰離子和過亞硝酸鹽的化學(xué)發(fā)光檢測。
Coelenterazine h:與Renilla熒光素酶或Gaussia熒光素酶使用具有一定的局限性。體外研究中比其他類似物更適合與鈣離子激活發(fā)光蛋白共用。據(jù)報道，Coelenterazine h的發(fā)光強度高于天然腔腸熒光素10-20倍，因此是用來檢測鈣離子濃度微小變化的有力工具。
Coelenterazine 400a: 是BRET研究中Rluc的底物，此腔腸素衍生物在390 nm和400nm之間發(fā)藍色光，對GFP acceptor的光發(fā)射干擾zui小。
（1）Coelenterazine（天然腔腸熒光素）
分子式：C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol 純度：95% 保存：-15°C避光，保存在惰性氣體下
Protocol：發(fā)光檢測實驗
1）使用管光度計室溫下定量檢測發(fā)光情況，每個樣品做三個平行；
2）加入底物10s內(nèi)立即檢測，“integration time”為1 s；
3）對于細菌表達Gluc系統(tǒng)，甲醇溶解底物腔腸素制備10 mM儲存液，終濃度為10μmol/L。儲存液-20 °C保存，工作液制備過程需避光并置于冰上。
（2）Coelenterazine 400 a/腔腸素400a
分子式：C26H21N3O 分子量：: 391.48 g/mol 純度：95%
儲存液制備：
1）開封前將瓶子放到室溫溫育，以避免產(chǎn)品發(fā)生任何的冷凝；
2）用125 μL無水乙醇溶解50 μg Coelenterazine 400 a，zui終濃度是0.4μg/μL. ，輕輕混勻；（注：避免用DMSO或其他溶劑來溶解腔腸素400a，因為試劑可能被氧化）
3）分裝后避光保存在-20°C，保持干燥；
（3）Coelenterazine h/ 腔腸素h（from Caliper LifeScience Inc.）
RediJectCoelenterazineh為即用的注射型生物發(fā)光底物，特別設(shè)計用于體內(nèi)成像研究。通過zui小化產(chǎn)品成分的變化，zui小化凍融次數(shù)和嚴格控制不同批次的產(chǎn)品，使用Caliper公司的Coelenterazine h能確保客戶得到高重復(fù)性的結(jié)果。
優(yōu) 點：
◆預(yù)制配方，不同批次間嚴格控制特別設(shè)計用于體內(nèi)研究；
◆即用型產(chǎn)品通過zui小化預(yù)成像準備步驟，減少時間和精力；
◆每瓶可用于5只動物的成像研究；（10 瓶/kit）
◆經(jīng)IVIS成像系統(tǒng)驗證，控制體內(nèi)成像質(zhì)量；
顏色：黃色溶液（溶于丙二醇/檸檬酸鹽）
濃度：150 μg/mL （10瓶無菌溶液，每瓶含1.2 mL濃度為150 μg/mL的Coelenterazine h ）
保存： Store at ≤ -70 °C。
使用及注射劑量：
開始實驗前，37 °C水浴鍋解凍，避免重復(fù)凍融。靜脈注射(i.v.)或腹腔注射(i.p.)。
1. 靜脈注射：推薦使用劑量15 μg/mouse(100 μL/mouse），用1 ml注射器直接從瓶內(nèi)吸取溶液，然后用25 gauge或更高的針頭注射入小鼠體內(nèi)。盡快成像檢測以獲得峰值信號。
2. 腹腔注射：推薦劑量是30 μg/mouse (200 μL/mouse)，方法同上。
應(yīng)用實例：
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產(chǎn)品報價：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格(元) |
40904ES03 | Coelenterazine天然腔腸熒光素 | 1mg | 1800.00 |
40904ES08 | Coelenterazine天然腔腸熒光素 | 5mg | 3600.00 |
40904ES10 | Coelenterazine天然腔腸熒光素 | 10mg | 4500.00 |
40905ES03 | Coelenterazine 400 a/腔腸素 400a | 1mg | 2080.00 |
40905ES08 | Coelenterazine 400 a/腔腸素 400a | 5mg | 6280.00 |
40905ES10 | Coelenterazine 400 a/腔腸素 400a | 10mg | 10760.00 |
40906ES03 | Coelenterazine h/ 腔腸素h | 1mg | 5145.00 |
40907ES01 | Rediject Coelenterazine h | 1 kit | 4863.00 |
