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Taq DNA連接酶（Taq DNA Ligase）
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Taq DNA連接酶（Taq DNA Ligase） | 11051ES80 | 1000 U | 346.00 |
Taq DNA連接酶（Taq DNA Ligase） | 11051ES84 | 2000 U | 656.00 |
11051ES92 | 10000 U | 2616.00 |
產(chǎn)品描述
Taq DNA Ligase是一種耐高溫連接酶，它能催化與同一互補(bǔ)靶DNA鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5´-磷酸和3´-羥基之間形成磷酸二酯鍵。該催化反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷酸鏈與互補(bǔ)靶 DNA *配對，且兩條寡核苷酸鏈之間沒有間隙的條件下才會發(fā)生。因此，可以用它來檢測單堿基替換。Taq DNA連接酶以NAD+為輔酶因子，在45℃-65℃范圍內(nèi)均有活性。
產(chǎn)品組分
編號 | 組 分 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | ||
11051ES80 (1000 U) | 11051ES84 (2000 U) | 11051ES80 (10000 U) | ||
11051-A | Taq DNA Ligase(40 U/µL) | 25 μL | 2×25 μL | 10×25 μL |
11051-B | 10×Taq DNA Ligase Buffer（含NAD+） | 1 mL | 2×1 mL | 10×1 mL |
來源
重組E. coli 菌株，含有從Thermus aquaticus HB8中克隆的連接酶基因。
產(chǎn)品應(yīng)用
1）用連接酶檢測反應(yīng)和連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對等位基因進(jìn)行特異性檢測；
2）通過PCR擴(kuò)增摻入磷酸化寡核苷酸進(jìn)行誘變；
3）同源重組。
單位定義
在50 μL 反應(yīng)體系中，45℃條件下，孵育15 min能使50%的1 μg經(jīng)BstEII消化的λDNA片段（12 bp粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
核酸內(nèi)切酶活性：在50 μL反應(yīng)體系中，10 μL酶溶液與0.5 μg pENZuC DNA作用，37℃孵育4 h，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，無肉眼可見的環(huán)狀切口DNA出現(xiàn)。
核酸外切酶活性：在50 μL反應(yīng)體系中，10 μL酶溶液和10000 cpm/μg放射性標(biāo)記的DNA作用，37℃孵育4 h，溶液中可溶性TCA的釋放量小于5.0%。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。Taq DNA連接酶于-20℃保存，緩沖液于-80℃保存。
使用方法
1）反應(yīng)體系配制：
組分 | 用量 |
DNA | up to 1 µg |
10×Taq DNA Ligase Buffer | 5 μL |
Taq DNA Ligase(40 U/µL) | 2 μL |
ddH2O | up to 50 μL |
2）反應(yīng)條件：45℃溫育15 min。加入終止染液（50%甘油，50 mM EDTA和溴酚蘭）終止反應(yīng)。
注意事項(xiàng)
1）10×Taq DNA Ligase Buffer中含有輔酶因子NAD+，為了延長NAD+的半衰期，Buffer應(yīng)于-80℃儲存；
2）Taq DNA Ligase不能替代T4 DNA ligase；
3）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
HB170629
